6.8.1.14DNA的定点诱变 目的:主要在于观察定点诱变后DNA表达蛋白的结构与功能的变化 采用酶和化学试剂切割DNA,或合成含有缺失或插入的引物,PCR放大,再通过连接 转化等手段,造成目的DNA的缺失或插入。 6.8.1.15克隆化基因在大肠杆菌和哺乳动物培养细胞中表达 将目的基因重组入相应的,分别可以在原核或真核细胞中进行表达的载体,采用物理或 化学方法将重组后的载体导入真核或原核细胞,使目的基因得以表达出所需的蛋白,用以研 究或作为产业生产。 6.8.1.16克隆化基因所表达蛋白质的检测和分析 此项实验包括两个部分。其一,单克隆抗体的制备和纯化,即分离出6.8.1.15介绍表达 出的蛋白,例如采用电泳分离方法,以此蛋白作为抗原激发兔免疫系统产生单抗,再予以纯 化。其二,应用此抗体检测靶组织相应蛋白(抗原)是否存在,及其含量。这类方法主要包 括免疫沉淀法、固相放射免疫测定(RIA)法和固定化蛋白质的免疫学测定( Western blot法) 其他比较热门的技术: 1.基因类 (1) cDNA Array FH Micro Array (2)基因全序列cDNA库筛选 (3) RACE PCR 2.蛋白类 (1)Western blot (2) ELISA (3)免疫组织化学 (4)单克隆抗体制备技术 (5)双向等电聚焦凝胶电泳 (6)蛋白芯片技术 3.基因功能类 (1)报道基因 (2)基因功能检测 (3) Footprint (4)凝胶阻滞分析 六.用分子生物学方法研究中医的现状 6.8.2.1分子生物学技术在中医基础理论研究中的应用 肾本质的研究。中医基础理论认为“肾为先天之本”、“肾藏精”、“肾主生长发育”,肾 在人体生命过程中起着极其重要的作用,因此有人把分子生物学技术引入到肾的本质研究中。 沈自尹等用RI-PCR技术发现肾阳虚证与下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素 (CRF)的mRNA转录受抑有关,从而将肾阳虚证定位到下丘脑。这一点似与肾为人体各脏 器的调节中心有所契合 可以展开讨论: 1)这样的结论合理与否,合理的部分和依据,不合理的部分和依据 2)如果你将进一步研究,计划如何着手? 6.8.2.2分子生物学技术在中医临床上的应用(以下依据教材上介绍) 6.8.2.3分子生物学技术在针灸研究中的应用 6.8.2.4分子生物技术在方药研究中的应用 6.8.3用分子生物学方法研究中医的范例 6.8.4展望 还是在几年前的九十年代初,在申报国家自然科学基金中医药实验研究的项目申请书中6．8．1．14 DNA 的定点诱变 目的：主要在于观察定点诱变后 DNA 表达蛋白的结构与功能的变化。 采用酶和化学试剂切割 DNA，或合成含有缺失或插入的引物，PCR 放大，再通过连接、 转化等手段，造成目的 DNA 的缺失或插入。 6．8．1．15 克隆化基因在大肠杆菌和哺乳动物培养细胞中表达 将目的基因重组入相应的，分别可以在原核或真核细胞中进行表达的载体，采用物理或 化学方法将重组后的载体导入真核或原核细胞，使目的基因得以表达出所需的蛋白，用以研 究或作为产业生产。 6．8．1．16 克隆化基因所表达蛋白质的检测和分析 此项实验包括两个部分。其一，单克隆抗体的制备和纯化，即分离出 6.8.1.15 介绍表达 出的蛋白，例如采用电泳分离方法，以此蛋白作为抗原,激发兔免疫系统产生单抗，再予以纯 化。其二，应用此抗体检测靶组织相应蛋白（抗原）是否存在，及其含量。这类方法主要包 括免疫沉淀法、固相放射免疫测定（RIA）法和固定化蛋白质的免疫学测定（Western blot 法）。 其他比较热门的技术： 1．基因类 （1）cDNA Array 和 Micro Array （2）基因全序列 cDNA 库筛选 （3）RACE PCR 2．蛋白类 （1）Western blot （2）ELISA （3）免疫组织化学 （4）单克隆抗体制备技术 （5）双向等电聚焦凝胶电泳 （6）蛋白芯片技术 3．基因功能类 （1）报道基因 （2）基因功能检测 （3）Footprint （4）凝胶阻滞分析 六．用分子生物学方法研究中医的现状 6．8．2．1 分子生物学技术在中医基础理论研究中的应用 肾本质的研究。中医基础理论认为“肾为先天之本”、“肾藏精”、“肾主生长发育”，肾 在人体生命过程中起着极其重要的作用，因此有人把分子生物学技术引入到肾的本质研究中。 沈自尹等用 RT-PCR 技术发现肾阳虚证与下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素 （CRF）的 mRNA 转录受抑有关，从而将肾阳虚证定位到下丘脑。这一点似与肾为人体各脏 器的调节中心有所契合。 可以展开讨论： 1）这样的结论合理与否，合理的部分和依据，不合理的部分和依据 2）如果你将进一步研究，计划如何着手？ 6．8．2．2 分子生物学技术在中医临床上的应用（以下依据教材上介绍） 6．8．2．3 分子生物学技术在针灸研究中的应用 6．8．2．4 分子生物技术在方药研究中的应用 6．8．3 用分子生物学方法研究中医的范例 6．8．4 展望 还是在几年前的九十年代初，在申报国家自然科学基金中医药实验研究的项目申请书中