实验原理 21质粒DNA的提取 1)质粒是一种染色体外的遗传因子,大小在1kb~200kb之间,是 具有双链闭合环状结构的DNA分子,主要发现于细菌、放线菌和 真菌细胞中。质粒具有自主复制能力, 使子代保持他们恒定的 复制数,可表达它携带的遗传信息 可以独立游离于细胞质内 ③爹全初孥楚史指宝樱成不能复,而它控 2)从大肠杆菌中抽提质粒DNA的方法很多,可以在实验中根据不 同的需要采用不同的方法。碱变性法抽提质粒DNA的基本原理是 根据染色体DNA和质粒DNA分子量的巨大差异而达到分离的 基磺酸钠(SDS)是一种阴离子表面活性剂 使细菌 细胞裂解,又能使一些蛋白质变 获得的DNA可用 件使DNA的氢键断裂 宿主染色体双螺旋结构解开而变性,而闭合环状的质粒DNA的两 条链不会完全分离,当加入溶液Ⅲ中和后,宿主DNA相对分子质 大,还没来得及复性,就在冰冷的条件下与SDS、蛋白质 子量的RNA等缠绕在一起而沉淀下来,而质粒DNA由于能够迅 配对恢复原来的构型而溶解在溶液中。实验原理 1.质粒DNA的提取 1）质粒是一种染色体外的遗传因子，大小在1kb~200kb之间，是 具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和 真菌细胞中。质粒具有自主复制能力，，能使子代保持他们恒定的 复制数，可表达它携带的遗传信息。它可以独立游离于细胞质内， 也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主细胞就不能复制，而它控 制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 2）从大肠杆菌中抽提质粒DNA的方法很多，可以在实验中根据不 同的需要采用不同的方法。碱变性法抽提质粒DNA的基本原理是 根据染色体DNA和质粒DNA分子量的巨大差异而达到分离的。十 二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌 细胞裂解，又能使一些蛋白质变性碱变性法因其抽提效果好，收得 率高，获得的DNA可用于酶切、连接与转化，因而被各实验室广 泛采用。抽提过程中在加入溶液II后，碱性条件使DNA的氢键断裂， 宿主染色体双螺旋结构解开而变性，而闭合环状的质粒DNA的两 条链不会完全分离，当加入溶液III中和后，宿主DNA相对分子质量 大，还没来得及复性，就在冰冷的条件下与SDS、蛋白质、高分 子量的RNA等缠绕在一起而沉淀下来，而质粒DNA由于能够迅速 配对恢复原来的构型而溶解在TE溶液中