实验流程 EGFP Kan T Xho I(158) ECo∥( pEGFP-N3) Ecoli(pET-28a) kot1(166) Eax I(166) Hind 111(173) Sal1(179) PEGFP-N3 pET28a Sac I(1 H I( 提取 pEGFP-N3 提取pET-28 I(231) Nco 1(296 以EGFP片段为横折 理行PCR扩增 丘oR1.和ndI双酶切处理 BamH I、NotI酶切,纯化 BamH、Notl酶切,纯化 PCR扩增引入切位点 EroR I, Hind Ill EcoR I EcoR 1, Hind III Hi nd III 目的基因 载体片段 双酶切处理 ↓T4连接酶连接 T,连接酶 重组质粒pE28aGFP) ↓转化 DH5apET28aGFP体内扩增实验流程