昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定 实验目的: 了解乙酰胆碱酯酶的作用,掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 试剂005mol,pH72磷酸盐缓冲液(PBS);ATCh液;称取 ATCh75mg加pH72PBS100m1即成。DTNB液称取DINB13mg加 p7.2 PB SoON即成。本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂,在 测试前按不同比例用乙醇充分溶解。 三、实验步骤 1、样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊 Culex pipiens pallens Coquillett敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊 作酶源。将N龄幼虫或刚羽化34天未吸血雌性成蚊,放人1 5ml离心管中,加100[lpH72PBS碾碎混匀,1000min离心 15min,取上清液再加9 OOpl ph72PBS稀释,待用。 2、实验方法将100协1蚊虫混匀液,滴人%孔微滴定板孔中, 每孔再加混有1x10-4moL的残杀威ATCh液1 OOmhZ,放 30C孵育30分钟后,每孔再加100 ul dtNB液,待反应5分 钟后,用酶标仪(北京新技术研究所提供MB-Ⅲ型)进行比色 四、结果分析 在410mu波长下读取光密度。每只蚊虫可测4-10孔取其OD平均 值。昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定 一、实验目的： 了解乙酰胆碱酯酶的作用，掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 试剂:0.05mo1/L, pH7.2 磷酸盐缓冲液(PBS) ; ATCh 液;称取 ATCh75mg 加 pH7.2PBS 100m1 即成。DTNB 液:称取 DTNB13mg 加 pH7. 2PB S 1 OOml 即成。本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂，在 测试前按不同比例用乙醇充分溶解。 三、实验步骤 1、 样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊 Culex pipiens pallens Coquillett 敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊 作酶源。将 N 龄幼虫或刚羽化 3-4 天未吸血雌性成蚊，放人 1. 5m1 离心管中，加 100[1 pH7.2PBS 碾碎混匀，10000r/min 离心 15min，取上清液再加 900pl pH7.2PBS 稀释，待用。 2、 实验方法:将 100 协 1 蚊虫混匀液，滴人%孔微滴定板孔中， 每孔再加混有 1 x 10-4mol/L 的残杀威 ATCh 液 1 OOmhZ,，放 30 C 孵育 30 分钟后，每孔再加 100ul DTNB 液，待反应 5 分 钟后，用酶标仪(北京新技术研究所提供 MB- III 型)进行比色。 四、结果分析 在 410mu 波长下读取光密度。每只蚊虫可测 4-10 孔取其 OD 平均 值