昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定 实验目的: 了解乙酰胆碱酯酶的作用,掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 试剂005mol,pH72磷酸盐缓冲液(PBS);ATCh液;称取 ATCh75mg加pH72PBS100m1即成。DTNB液称取DINB13mg加 p7.2 PB SoON即成。本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂,在 测试前按不同比例用乙醇充分溶解。 三、实验步骤 1、样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊 Culex pipiens pallens Coquillett敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊 作酶源。将N龄幼虫或刚羽化34天未吸血雌性成蚊,放人1 5ml离心管中,加100[lpH72PBS碾碎混匀,1000min离心 15min,取上清液再加9 OOpl ph72PBS稀释,待用。 2、实验方法将100协1蚊虫混匀液,滴人%孔微滴定板孔中, 每孔再加混有1x10-4moL的残杀威ATCh液1 OOmhZ,放 30C孵育30分钟后,每孔再加100 ul dtNB液,待反应5分 钟后,用酶标仪(北京新技术研究所提供MB-Ⅲ型)进行比色 四、结果分析 在410mu波长下读取光密度。每只蚊虫可测4-10孔取其OD平均 值
昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定 一、实验目的： 了解乙酰胆碱酯酶的作用，掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 试剂:0.05mo1/L, pH7.2 磷酸盐缓冲液(PBS) ; ATCh 液;称取 ATCh75mg 加 pH7.2PBS 100m1 即成。DTNB 液:称取 DTNB13mg 加 pH7. 2PB S 1 OOml 即成。本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂，在 测试前按不同比例用乙醇充分溶解。 三、实验步骤 1、 样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊 Culex pipiens pallens Coquillett 敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊 作酶源。将 N 龄幼虫或刚羽化 3-4 天未吸血雌性成蚊，放人 1. 5m1 离心管中，加 100[1 pH7.2PBS 碾碎混匀，10000r/min 离心 15min，取上清液再加 900pl pH7.2PBS 稀释，待用。 2、 实验方法:将 100 协 1 蚊虫混匀液，滴人%孔微滴定板孔中， 每孔再加混有 1 x 10-4mol/L 的残杀威 ATCh 液 1 OOmhZ,，放 30 C 孵育 30 分钟后，每孔再加 100ul DTNB 液，待反应 5 分 钟后，用酶标仪(北京新技术研究所提供 MB- III 型)进行比色。 四、结果分析 在 410mu 波长下读取光密度。每只蚊虫可测 4-10 孔取其 OD 平均 值
昆虫中肠淀粉酶活性测定 实验目的: 了解中肠淀粉酶的作用,掌握中肠淀粉酶活性的测定方法 实验方法 1、肠液的提取 电刺激法取肠液,10K离心5min,上清液为酶液,用085%生理盐 水稀释5倍备用。 2:测定步骤 a淀粉酶及(a+β)淀粉酶的活性测定每个重复区用5个试管, 同时做等量对照试管,每个试管加酶液1mL,在70℃恒温水浴中 加热15min,取出后迅速用自来水冷却。各管加入1mLpH56 柠檬酸缓冲液,对照管加4mL04mo1/ NAoh,纯化酶的活 性。将对照与测试管置于40℃(±05℃烜恒温水浴中保温15min, 各管加入40℃左右预热的淀粉液2mL,摇匀,立即放入40℃水浴 中保温5min,取出后迅速加入4mL04mo1/ L Naoh终 止酶反应。 结果分析 在410mu波长下读取光密度。取其OD平均值
昆虫中肠淀粉酶活性测定 一、实验目的： 了解中肠淀粉酶的作用，掌握中肠淀粉酶活性的测定方法。 二、实验方法 1、 肠液的提取： 电刺激法取肠液,10Ｋ离心 5ｍｉｎ,上清液为酶液,用 0 85%生理盐 水稀释 5 倍备用。 2：测定步骤： α 淀粉酶及(α+β) 淀粉酶的活性测定每个重复区用5 个试管, 同时做等量对照试管,每个试管加酶液 1ｍＬ,在 70℃恒温水浴中 加热 15ｍｉｎ,取出后迅速用自来水冷却。各管加入 1ｍＬｐＨ5.6 柠檬酸缓冲液,对照管加 4ｍＬ0 4ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,纯化酶的活 性。将对照与测试管置于 40℃(±0 5℃)恒温水浴中保温15ｍｉｎ, 各管加入 40℃左右预热的淀粉液 2ｍＬ,摇匀,立即放入 40℃水浴 中保温 5ｍｉｎ,取出后迅速加入 4ｍＬ0 4ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,终 止酶反应。 三、结果分析 在 410mu 波长下读取光密度。取其 OD 平均值
昆虫中肠酯酶活性的测定 实验目的: 了解中肠酯酶的作用,掌握中肠酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 供试物质与供试昆虫β谷甾醇含量95%瑞香亭,含量95%;狼 毒色原酮,含量95%‰。 三、实验方法 处理昆虫时用β-谷甾醇等3种化合物(200μgmL)和 印楝素(80μ吕mL)处理叶碟后连续饲喂菜粉蝶5龄幼虫,72 h后取样。每处理取中肠10条放入玻璃匀浆器中加1mL 磷酸盐缓冲液(004μmo1mL,pH=7),在冰浴中匀浆将 匀浆液倒入离心管中离心(2100G,15min)后取上清液用缓 冲液稀释10倍作为酶液。用“ FoLin-酚”法测定酶液 母液中蛋白质含量,即1mL酶液母液+5 mAolin-甲 液+05 mlfoi in-乙液+1mL双蒸水,然后在30℃下反 应30min后,求出OD500值,从标准曲线上求出1mL酶液 中蛋白质的量(mg,最后换算成mg蛋白质/min水解a 醋酸萘酯的μmoⅠ数作为酶活力指标。在具塞试管内加入 5mL底物溶液(3×10-4μ mo mla-醋酸萘酯)置于 25℃下平衡25min,加入酶液1mL,置25℃下温育30mi n,立即加入1mL显色剂(1%固定兰盐B溶液和25%十二烷 基硫酸钠溶液2:5混合)摇匀,中止反应并显色,30min后测
昆虫中肠酯酶活性的测定 一、实验目的： 了解中肠酯酶的作用，掌握中肠酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 供试物质与供试昆虫β 谷甾醇,含量 95%;瑞香亭,含量 95%;狼 毒色原酮,含量 95%。 三、实验方法 处理昆虫时,用β-谷甾醇等 3 种化合物(200μｇ ｍＬ)和 印楝素(80μｇ ｍＬ)处理叶碟后连续饲喂菜粉蝶5龄幼虫,72 ｈ后取样。每处理取中肠 10 条,放入玻璃匀浆器中,加 1ｍＬ 磷酸盐缓冲液(0 04μｍｏｌ ｍＬ,ｐＨ=7),在冰浴中匀浆,将 匀浆液倒入离心管中离心(2100Ｇ,15ｍｉｎ)后取上清液用缓 冲液稀释 10 倍作为酶液。用“Ｆｏｌｉｎ-酚”法测定酶液 母液中蛋白质含量,即 1ｍＬ酶液母液+5ｍＬＦｏｌｉｎ-甲 液+0 5ｍＬＦｏｌｉｎ-乙液+1ｍＬ双蒸水,然后在 30℃下反 应 30ｍｉｎ后,求出ＯＤ500 值,从标准曲线上求出 1ｍＬ酶液 中蛋白质的量(ｍｇ),最后换算成ｍｇ蛋白质/ｍｉｎ水解α- 醋酸萘酯的μｍｏｌ数作为酶活力指标。在具塞试管内加入 5ｍＬ底物溶液(3×10-4μｍｏｌ ｍＬα-醋酸萘酯)置于 25℃下平衡 25ｍｉｎ, 加入酶液 1ｍＬ,置 25℃下温育 30ｍｉ ｎ,立即加入 1ｍＬ显色剂(1%固定兰盐Ｂ溶液和 25%十二烷 基硫酸钠溶液 2∶5 混合)摇匀,中止反应并显色,30ｍｉｎ后测
定OD600值 四、结果分析 从标准曲线上求出a-萘酚的浓度
定ＯＤ600 值。 四、结果分析 从标准曲线上求出α-萘酚的浓度
昆虫谷胱甘肽过氧化物酶活力测定 实验目的: 了解中肠谷胱甘肽过氧化物酶的作用,掌握中肠酯谷胱甘肽过氧 化物酶活性的测定方法。 、实验材料 黑腹果蝇( dro soph ila me lanogaster),野生型0r。将15 天龄未交配果蝇随机分成4组,每组1000只,雌雄各半,分别给予 含亚硒酸钠0、015、210和810Lgg的培养基,雌雄分开喂养。 三、实验方法 1、前处理 各实验组雌雄果蝇给予不同浓度亚硒酸钠喂养16天后分别麻 醉,加入冷生理盐水,在冰浴中制成7%匀浆(每组雌雄果蝇匀 浆一式5份),3500rmin低温离心10min 2、测定 取上清液测定GSH2Px活力(DTNB比色法) 四、结果分析 在410mu波长下读取光密度。取其OD平均值
昆虫谷胱甘肽过氧化物酶活力测定 一、实验目的： 了解中肠谷胱甘肽过氧化物酶的作用，掌握中肠酯谷胱甘肽过氧 化物酶活性的测定方法。 二、实验材料 黑腹果蝇(dro soph ila melanogaster) , 野生型O r。将15 天龄未交配果蝇随机分成4组, 每组1 000只, 雌雄各半, 分别给予 含亚硒酸钠0、015、210和810Lgö g 的培养基,雌雄分开喂养。 三、实验方法 1、 前处理 各实验组雌雄果蝇给予不同浓度亚硒酸钠喂养16天后分别麻 醉, 加入冷生理盐水, 在冰浴中制成7% 匀浆(每组雌雄果蝇匀 浆一式5份) , 3 500röm in 低温离心10 m in。 2、 测定 取上清液测定GSH2Px 活力(DTNB 比色法) 四、结果分析 在 410mu 波长下读取光密度。取其 OD 平均值
农药毒理学实验指导 植物保护系化保教研室 2004.5
农药毒理学实验指导 植物保护系化保教研室 2004.5