联反应包括了酶的氨基与常用商品戊二醛溶液中存在的α,B-不饱和寡聚体的双键的反应。用重 蒸过的戊二醛新配制的溶液与酶的反应性远远低与商品戊二醛溶液,证实了这种观点。不溶复合 物的形成严格地依赖于酶和戊二醛的相对浓度以及溶液的pH和离子强度。蛋白质的最适浓度是 50mg/ml和200mgml,戊二醛的最适浓度是0.3%和06%。当戊二醛与酶的比例为10%(ww) 时,会产生均匀的不溶产品。交联反应的时间、pH、离子强度要随酶的不同而异 923包埋法: 923.1网格包埋法: ①聚丙烯酰胺凝胶包埋: 将酶液或细胞悬液、丙烯酰胺(CH2= CH-CO-NH2)、N,N-甲叉双丙烯酰胺 (CH2= CH-CO-NH-CH2-HN-CO-CH=CH2)、NN,N,N-四甲基乙二胺( TEMED)或二甲氨基丙 腈( DMAPN)[加速剂]、过硫酸铵(NH4)2S2O8]或核黄素[引发剂、缓冲液(常用 Tris-HCI缓冲 液)按一定比例混合,在无氧条件下聚合(若用核黄素作引发剂需照光)成凝胶(双键打开连接) 再用过筛或通过注射针头挤岀使凝胶破碎成小颗粒,洗涤至洗涤液中无酶活性后即成。此法的缺 点是聚合反应时酶容易失活 ②海藻酸钙凝胶包埋: 海藻酸是从褐藻中提取岀来的一种多糖,它是以1,4键连接的β-甘露糖醛酸和α--古洛糖 醛酸不同排列的长链。在单价阳离子存在下,低浓度的海藻酸以溶液形式存在;在二价阳离子, 特别是钙存在时,溶液发生凝胶化。此法适合包埋细胞 将海藻酸溶液(4%,w)与细胞泥混合,用注射器通过孔径lmm的针头从20cm高处把混 合液滴入0.2 mol/L CaCI2溶液中,让凝胶颗粒在CaCl2溶液中固化20min即成 此法方法简单,条件温和,操作在室温下进行;但海藻酸凝胶在含多价阴离子(磷酸盐 柠檬酸盐等)以及高浓度电解质(K♂、Na′)溶液中不稳定,Ca3ˉ易脱落,凝胶变软,甚至溶解。 有人用乙烯多胺、戊二醛等制成交联海藻酸钙,可以弥补这个缺陷 ③K-角叉菜胶包埋 κ-角叉菜胶是从红藻中分离得到的一种多糖,由β-半乳糖硫酸酯和3.6-失水-α-半乳糖以 1,4键连接而成。角叉菜胶除κ型外,还有θ、1、λ、μ、ν、ξ等型,其不同点在于硫酸酯 含量、结合部位以及3,6-失水-α-半乳糖的含量不同。在实际应用时是使用凝胶性能好,且能大 量制造的κ型 将κ-角叉菜胶溶于60℃生理盐水(0.9%NaCl)中,使其浓度为4%,然后降温至40℃保 持其为溶液状态。在40℃下将κ-角叉菜胶溶液与细胞泥或酶混合,用注射器将混合液滴入2% KCl溶液中,让其固化20min7 联反应包括了酶的氨基与常用商品戊二醛溶液中存在的α,β-不饱和寡聚体的双键的反应。用重 蒸过的戊二醛新配制的溶液与酶的反应性远远低与商品戊二醛溶液，证实了这种观点。不溶复合 物的形成严格地依赖于酶和戊二醛的相对浓度以及溶液的 pH 和离子强度。蛋白质的最适浓度是 50mg/ml 和 200mg/ml，戊二醛的最适浓度是 0.3％和 0.6％。当戊二醛与酶的比例为 10％（w/w） 时，会产生均匀的不溶产品。交联反应的时间、pH、离子强度要随酶的不同而异。 9.2.3 包埋法： 9.2.3.1 网格包埋法： ① 聚丙烯酰胺凝胶包埋： 将 酶 液 或 细 胞 悬 液 、 丙 烯 酰 胺 （ CH2=CH-CO-NH2 ） 、 N,N'- 甲 叉 双 丙 烯 酰 胺 （CH2=CH-CO-NH-CH2-HN-CO-CH=CH2）、N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）或二甲氨基丙 腈（DMAPN）[加速剂]、过硫酸铵[(NH4)2S2O8]或核黄素[引发剂]、缓冲液（常用 Tris-HCl 缓冲 液）按一定比例混合，在无氧条件下聚合（若用核黄素作引发剂需照光）成凝胶（双键打开连接）， 再用过筛或通过注射针头挤出使凝胶破碎成小颗粒，洗涤至洗涤液中无酶活性后即成。此法的缺 点是聚合反应时酶容易失活。 ② 海藻酸钙凝胶包埋： 海藻酸是从褐藻中提取出来的一种多糖，它是以 1,4 键连接的β-甘露糖醛酸和α-L-古洛糖 醛酸不同排列的长链。在单价阳离子存在下，低浓度的海藻酸以溶液形式存在；在二价阳离子， 特别是钙存在时，溶液发生凝胶化。此法适合包埋细胞。 将海藻酸溶液（4％,w/v）与细胞泥混合，用注射器通过孔径 1mm 的针头从 20cm 高处把混 合液滴入 0.2mol/L CaCl2 溶液中，让凝胶颗粒在 CaCl2 溶液中固化 20min 即成。 此法方法简单，条件温和，操作在室温下进行； 但海藻酸凝胶在含多价阴离子（磷酸盐、 柠檬酸盐等）以及高浓度电解质（K ＋、Na＋）溶液中不稳定，Ca2＋易脱落，凝胶变软，甚至溶解。 有人用乙烯多胺、戊二醛等制成交联海藻酸钙，可以弥补这个缺陷。 ③ κ-角叉菜胶包埋： κ-角叉菜胶是从红藻中分离得到的一种多糖，由β-半乳糖硫酸酯和 3,6-失水-α-半乳糖以 1,4 键连接而成。角叉菜胶除κ型外，还有θ、ι、λ、μ、ν、ξ等型，其不同点在于硫酸酯 含量、结合部位以及 3,6-失水-α-半乳糖的含量不同。在实际应用时是使用凝胶性能好，且能大 量制造的κ型。 将κ-角叉菜胶溶于 60℃生理盐水（0.9％NaCl）中，使其浓度为 4％，然后降温至 40℃保 持其为溶液状态。在 40℃下将κ-角叉菜胶溶液与细胞泥或酶混合，用注射器将混合液滴入 2％ KCl 溶液中，让其固化 20min