e.生成希夫碱后还原:见第三章 ④脒基化反应 4a,4m+,m画 含有氰基的载体在乙醇中用干燥氯化氢活犭2→-CN +H2 m 化,生成容易被亲核基团作用的亚胺酯衍生物,再与酶分子的氨基反应生成脒化物。 脒化反应也可以发生在溴化氰活化的含氨基载体和酶分子的氨基之间,从而在酶与载体间 生成胍基键。 (CH2)3H2 ⑤无机载体表面硅烷化 Si-(CH2)3N z 无机载体的化学性质不够活泼,进行共价偶联比较困难。 可用硅烷化的方法来解决。如多孔玻璃或磁性氧化铁表面用3-氨丙基三乙氧硅烷进行硅烷化,可 玻璃表面也可用澳化氰活化,生成环亚氨碳酸衍生物,B水 引入氨基。 HO H20 H20 OH ⑥金属键合/螯合 过渡金属常能形成配位化合物,载体和酶分子上的 些基团可以成为配体,通过形成配位键,过渡金属原子可在载体和酶之间起连接作用由于钛和锆 的氧化物没有毒性,所以常用钛和锆的氯化物活化载体,或者用它们在碱性条件下生成的水解产 物沉淀作为载体,来固定酶。此法所用的载体可以是纤维素、玻璃、尼龙、硅胶、葡聚糖、白明 胶、角闪石、磁性氧化铁等。现举一个用TiCl4活化无机载体并与酶结合的例子: a.取10g无机载体(多孔铝、不锈钢、镍-镍氧化物)放入反应瓶。 b.把反应瓶一部分浸入冰浴,再加62.5m冷水混合 c.缓慢加入63m纯的TiCl4,并强力搅拌 d.把反应瓶从冰浴中取出,加热到80℃并保温1小时。 e.用自来水把载体上的水合钛氧化层彻底洗涤 f.干燥洗净的有水合钛氧化层的载体,110℃下干燥过夜。 g.将含1g蛋白质的酶液加入已活化的载体,在0~5℃接触18小时。 h.除去上清液,用无离子水洗固定化酶4~6次。 HB③ 9.22交联法: 酶分子间交联最通用的试剂是戊二醛,最初认为其机 理是试剂的醛基与酶分子的氨基形成希夫碱,但交联的键 C)CHC一 H舞l 对pH和温度极其稳定,看来不是因为形成了希夫碱,因为 C=N键的一侧须有一个芳环此键才能稳定。有人提出,交6 e. 生成希夫碱后还原：见第三章。 ④ 脒基化反应： 含有氰基的载体在乙醇中用干燥氯化氢活 化，生成容易被亲核基团作用的亚胺酯衍生物，再与酶分子的氨基反应生成脒化物。 脒化反应也可以发生在溴化氰活化的含氨基载体和酶分子的氨基之间，从而在酶与载体间 生成胍基键。 ⑤ 无机载体表面硅烷化： 无机载体的化学性质不够活泼，进行共价偶联比较困难。 可用硅烷化的方法来解决。如多孔玻璃或磁性氧化铁表面用 3-氨丙基三乙氧硅烷进行硅烷化，可 引入氨基。 玻璃表面也可用溴化氰活化，生成环亚氨碳酸衍生物。 ⑥ 金属键合／螯合： 过渡金属常能形成配位化合物，载体和酶分子上的一 些基团可以成为配体，通过形成配位键，过渡金属原子可在载体和酶之间起连接作用由于钛和锆 的氧化物没有毒性，所以常用钛和锆的氯化物活化载体，或者用它们在碱性条件下生成的水解产 物沉淀作为载体，来固定酶。此法所用的载体可以是纤维素、玻璃、尼龙、硅胶、葡聚糖、白明 胶、角闪石、磁性氧化铁等。现举一个用 TiCl4 活化无机载体并与酶结合的例子： a．取 10g 无机载体（多孔铝、不锈钢、镍-镍氧化物）放入反应瓶。 b．把反应瓶一部分浸入冰浴，再加 62.5ml 冷水混合。 c．缓慢加入 6.3ml 纯的 TiCl4，并强力搅拌。 d．把反应瓶从冰浴中取出，加热到 80℃并保温 1 小时。 e．用自来水把载体上的水合钛氧化层彻底洗涤。 f．干燥洗净的有水合钛氧化层的载体，110℃下干燥过夜。 g．将含 1g 蛋白质的酶液加入已活化的载体，在 0～5℃接触 18 小时。 h．除去上清液，用无离子水洗固定化酶 4～6 次。 9.2.2 交联法： 酶分子间交联最通用的试剂是戊二醛，最初认为其机 理是试剂的醛基与酶分子的氨基形成希夫碱，但交联的键 对 pH 和温度极其稳定，看来不是因为形成了希夫碱，因为 C＝N 键的一侧须有一个芳环此键才能稳定。有人提出，交