拷贝数很有限,所以传代后的细胞外源 基因大多数以单拷贝形式存在可以用 两种方法来增加外源基因在细胞中的 对拷贝数:一,使具有相同的表达产物 基困而不同选择基因的质粒共转染,然 后细胞在含两种选择剂的培养液中培 养,选择后细胞多数含两拷贝的表达产 物基因;其二,用带选择基因和表达产 物基因同仅含表达产物基因的质粒共 转染,两者的量比例前者比后者应越小 越好,并且前者DNA量少一点较好 通过单一选择剂的选择,可望得到多拷 贝的转化细胞 右图:多功能细胞电穿孔仪 1.17微离子轰击法 使用高能微粒子轰击将DNA劲培 养细胞或活的哺乳动物组织内,在贴壁 细胞、悬浮细胞、活体组织中均能很好 表达。亚微粒的钨和金能自发地吸附 DNA,将这些”微弹”加速到很快的速 度轰击细胞。微粒子进入细胞后,DNA 将逐渐从粒子中释放出来,并进行基因 表达。这一方法已用于植物基因工程及 在培养的各类细胞,包括人类表皮细 胞、内皮细胞、成纤维细胞等等。其优 点是可直接对在体器官进行转移,有广 阔应用前景。微粒子轰击后可使104 105的细胞发生DNA整合。 12基因转移的病毒方法 逆转录病毒载体 DNA病毒载体 121逆转录病毒载体拷贝数很有限, 所以传代后的细胞外源 基因大多数以单拷贝形式存在. 可以用 两种方法来增加外源基因在细胞中的 对拷贝数: 一, 使具有相同的表达产物 基困而不同选择基因的质粒共转染, 然 后细胞在含两种选择剂的培养液中培 养, 选择后细胞多数含两拷贝的表达产 物基因; 其二, 用带选择基因和表达产 物基因同仅含表达产物基因的质粒共 转染, 两者的量比例前者比后者应越小 越好, 并且前者 DNA 量少一点较好, 通过单一选择剂的选择, 可望得到多拷 贝的转化细胞 右图：多功能细胞电穿孔仪 1.1.7 微离子轰击法 使用高能微粒子轰击将 DNA 劲培 养细胞或活的哺乳动物组织内，在贴壁 细胞、悬浮细胞、活体组织中均能很好 表达。亚微粒的钨和金能自发地吸附 DNA，将这些”微弹” 加速到很快的速 度轰击细胞。微粒子进入细胞后，DNA 将逐渐从粒子中释放出来，并进行基因 表达。这一方法已用于植物基因工程及 在培养的各类细胞，包括人类表皮细 胞、内皮细胞、成纤维细胞等等。其优 点是可直接对在体器官进行转移，有广 阔应用前景。微粒子轰击后可使 10-4～ 10-5 的细胞发生 DNA 整合。 1.2 基因转移的病毒方法 逆转录病毒载体 DNA 病毒载体 1.2.1 逆转录病毒载体