3.基因表达载体的构建 首先用一定的 切割载体，使它出现一个切口：然后用 明制或 的限制酶切割含有目的基因的DNA片段：再利用 将目的基因片段拼接到载体的切 处。 三、将目的基因导入受体细胞 1转化：目的基因讲入受体细胞内并在受体细胞内 和的过程。 2目的基因导入受体细嗣的方法 ()目的基因导入植物细胞 ①花粉管通道法 I,用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入 中。 Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借 助 井入 ②农杆菌转化法 农杆菌的特点：农杆菌自然条件下侵染 植物和植物：农杆菌的质粒 的 能够整合到所侵染细胞的】 上。 Ⅱ转化方法：将目的基因插入农杆菌 中让农杆菌侵染植物细胞。 (2)目的基因导入动物细胞 ①常用方法 法 ②常用受体细胞： (3)目的基因导入微生物细形 ①方法：用 _处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 然后将重组的基因表达载体导入其中。 ②常用受体细胞：原核细胞（使用最广泛的是大形肠杆菌） 四、目的基因的检测与鉴定 1分子水平检测 (I)通过等技术检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因或检测目的基因 是否转录出mRNA。 (2)从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行 杂交检测目的基因是否翻 译成了蛋白质。 2.个体生物学水平鉴定 的接种实验，以确定是否有抗性及抗性程度。基因工程产品需要与天然 产品活性进行比较等。 ■■■■课堂探究 课堂探究一获取目的基因和构建基因表达载体 1.PCR 术与生物体内DNA复制的比较。 比较项目PCR技术 DNA复制 DNA在 作用下变性韬 方式 旋 催化 细胞主要在细胞核 场 细孢 (在PCR扩增仅内) _(Tag DNA聚 普通的」 温度 需控制温度，在 温度下 细胞内 条件 3.基因表达载体的构建 首先用一定的 切割载体,使它出现一个切口;然后用 限制酶或 的限制酶切割含有目的基因的 DNA 片段;再利用 将目的基因片段拼接到载体的切 口处。 三、将目的基因导入受体细胞 1.转化:目的基因进入受体细胞内,并在受体细胞内 和 的过程。 2.目的基因导入受体细胞的方法 (1)目的基因导入植物细胞 ①花粉管通道法 Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的 DNA 溶液直接注入 中。 Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内,剪去柱头,将 DNA 溶液滴加在花柱切面上,使目的基因借 助 进入 。 ②农杆菌转化法 Ⅰ.农杆菌的特点:农杆菌自然条件下侵染 植物和 植物;农杆菌的 Ti 质粒上 的 能够整合到所侵染细胞的 上。 Ⅱ.转化方法:将目的基因插入农杆菌 中,让农杆菌侵染植物细胞。 (2)目的基因导入动物细胞 ①常用方法: 法。 ②常用受体细胞: 。 (3)目的基因导入微生物细胞 ①方法:用 处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态, 然后将重组的基因表达载体导入其中。 ②常用受体细胞:原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌)。 四、目的基因的检测与鉴定 1.分子水平检测 (1)通过 等技术检测受体细胞染色体 DNA 上是否插入了目的基因或检测目的基因 是否转录出 mRNA。 (2)从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行 杂交,检测目的基因是否翻 译成了蛋白质。 2.个体生物学水平鉴定 包括 的接种实验,以确定是否有抗性及抗性程度。基因工程产品需要与天然 产品活性进行比较等。 课堂探究 课堂探究一 获取目的基因和构建基因表达载体 1.PCR 技术与生物体内 DNA 复制的比较。 比较项目 PCR 技术 DNA 复制 区 别 解旋 方式 DNA 在 作用下变性解 旋 催化 场所 细胞 (在 PCR 扩增仪内) 细胞 (主要在细胞核 内) 酶 耐高温的 (Taq DNA 聚 合酶) 、普通的 等 温度 需控制温度,在 温度下 细胞内 条件