生物技术概论 互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因：②根据己知 的蛋白质的氨基酸序列推测出相应的RNA序列，然后按碱基互补配对原则，推测出它的 结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 (3)聚合酶链式反应法：该方法是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的，可 从痕量的DNA样品中特异快速扩增获得某一区域的DNA片段。 (4)mRNA差异显示法：先用PCR技术扩增所有的mRNA、生成cDNA群体，再用 测序凝胶电泳获取所需要的目的基因，然后再用PC℉扩增。简单讲，就是从基因的转录产 物mRNA来反转录成cDNA作为目的基因。 3.筛选重组子的方法有哪些，并简述其原理。 [思路提示] (1)根据载体的遗传标记基因筛选。在构建基因工程载体系统时，通常在载体DNA 分子中组装一种或两种选择标记基因在受体细胞内进行表达，使其呈现出特殊的表型或遗传 学性状，作为筛选转化子的依据。 (2)根据报告基因筛选。把报告基因的编码序列和基因表达调控序列相融合形成嵌合 基因，或与其他目的基因相融合，在调控序列的调节下进行表达，从而利用它的表达产物来 确定目的基因的表达调控，筛选转化子。 (3)根据形成的噬菌斑筛选。以DNA为载体的DNA重组分子经体外包装后转染受 体菌，转化子在固体培养基平板上被裂解形成噬菌斑，而非转化子正常生长，从而进行筛选。 4.简述基因编辑的方法有哪些。 [思路提示]基因编辑技术是一种定向改变细胞或者生物个体遗传信息的实验方法，该 技术的应用可以对生物基因组进行基因定点敲除、替换、突变及引入外源基因等人工修饰和 改造，并且修饰后的遗传信息可以通过生殖系统遗传给子代生物，使遗传的子代个体表达修 饰的性状，通过对基因修饰生物的研究帮助人类探索生命本质，揭示疾病发生之谜，寻求疾 病预防与治疗的有效方法。 常用的方法有：锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸 酶(transcription activator--like effector nuclease,.TALEN)和成簇的规律间隔短回文重复序列 及相关序列9系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated sequences 9,CRISPR/Cas9). (复旦大学皮妍)生物技术概论 互补的单链 DNA，然后在酶的作用下合成双链 DNA，从而获得所需要的基因；②根据已知 的蛋白质的氨基酸序列推测出相应的 mRNA 序列，然后按碱基互补配对原则，推测出它的 结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 （3）聚合酶链式反应法：该方法是以 DNA 变性、复制的某些特性为原理设计的，可 从痕量的 DNA 样品中特异快速扩增获得某一区域的 DNA 片段。 （4）mRNA 差异显示法：先用 PCR 技术扩增所有的 mRNA、生成 cDNA 群体，再用 测序凝胶电泳获取所需要的目的基因，然后再用 PCR 扩增。简单讲，就是从基因的转录产 物 mRNA 来反转录成 cDNA 作为目的基因。 3. 筛选重组子的方法有哪些，并简述其原理。 [思路提示] （1）根据载体的遗传标记基因筛选。在构建基因工程载体系统时，通常在载体 DNA 分子中组装一种或两种选择标记基因在受体细胞内进行表达，使其呈现出特殊的表型或遗传 学性状，作为筛选转化子的依据。 （2）根据报告基因筛选。把报告基因的编码序列和基因表达调控序列相融合形成嵌合 基因，或与其他目的基因相融合，在调控序列的调节下进行表达，从而利用它的表达产物来 确定目的基因的表达调控，筛选转化子。 （3）根据形成的噬菌斑筛选。以λDNA 为载体的 DNA 重组分子经体外包装后转染受 体菌，转化子在固体培养基平板上被裂解形成噬菌斑，而非转化子正常生长，从而进行筛选。 4. 简述基因编辑的方法有哪些。 [思路提示] 基因编辑技术是一种定向改变细胞或者生物个体遗传信息的实验方法，该 技术的应用可以对生物基因组进行基因定点敲除、替换、突变及引入外源基因等人工修饰和 改造，并且修饰后的遗传信息可以通过生殖系统遗传给子代生物，使遗传的子代个体表达修 饰的性状，通过对基因修饰生物的研究帮助人类探索生命本质，揭示疾病发生之谜，寻求疾 病预防与治疗的有效方法。 常用的方法有：锌指核酸酶（zinc finger nuclease，ZFN）、类转录激活因子效应物核酸 酶（transcription activator-like effector nuclease，TALEN）和成簇的规律间隔短回文重复序列 及相关序列 9 系统（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated sequences 9，CRISPR/Cas9）。 （复旦大学 皮妍）