《食用菌栽培学》 实验指导书 宝 实验一母种培养基的制作与转管技术 实验日的 通过实验学报食用母种培养基的制作及母种转管技术。 二、实验用品、用具 马铃薯、跑萄格、琼脂、妙布、试管、分转满斗、电护、高压锅、棉花、酒精灯、净化工作台、培养箱、母种、接种工具等。 三、实验过程 (一)PDA培养基的配制 1、配方：马铃著200g,葡萄糖20g,琼盾20g,水1000ml。 2、制作： ①选择质量较好的马学箬洗净、去皮，切成1em*1cem的小方块，称取20g加自来水100ml,加热煮沸20分钟至熟雨不烂的程度，用4~8层纱 布过滤，得滤液A ②向流中加入引一2，用个大加。不用韩程并。直到全部溶解后再用布过一次，得液，将法液B入量杯内， 分装或20mm20mm的试管中，一装入量为共总长的5一4。 然后溶液C老热快速分装于18 一的试管中，一般装入量为其总长的1/6一14。分装时，应尽量注意不要使培养基粘附 于管口壁上，如有则用干净妙布擦去，为了避免培养基黏附于管口壁上。可使用分装器进行分装。 ③分装完毕后，率上棉塞，棉塞要求松繁适度。棉塞的长约3c,一般塞入长度钓为棉塞总长度的三分之二。 ©棉塞寒好后，把试管扎成几摆，其抱疾部分用油纸或生皮纸包扎好，竖直放入高压锅内，在L,1k/压力12！℃条件下灭黄30分钟 ⑦灭菌后，特培养基温度下降到60℃时，再摆成斜面，以励冷凝水积聚过多。摆咸斜面卧，先在桌面上放置一根厚度约为1.心m的水板。将试管 逐支斜放于木板上，使斜面长度不超过试管总长度的1/2，冷却凝圆后，即成斜面培养基。灭菌后的斜面培养基在使用前应进行无菌检查，即以制 备的培养基中取3一5支，放置于30℃的恒温箱中培养3天，如培养基表面仍然光清，无杂菌出现，就可移入4℃冰箱中保存备用。 (二)母种转管技术 种 3、培养：把接种后的新鲜培养桔试管放在无光、23℃左右进行培养，直至长满菌丝， 注意：品接种用具灭菌并稍。B.转管总次数不超过5次。C一支母种可转管30~50支母种。 《食用菌栽培学》 实验指导书 园艺实验室 2011.11 实验一 母种培养基的制作与转管技术 一、实验目的 通过实验掌握食用菌母种培养基的制作及母种转管技术。 二、实验用品、用具 马铃薯、葡萄糖、琼脂、纱布、试管、分装漏斗、电炉、高压锅、棉花、酒精灯、净化工作台、培养箱、母种、接种工具等。 三、实验过程 （一）PDA培养基的配制 1、配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml。 2、制作： ①选择质量较好的马铃薯洗净、去皮，切成1cm*1cm的小方块，称取200g，加自来水1000ml，加热煮沸20分钟至熟而不烂的程度，用4～8层纱 布过滤，得滤液A。 ②向滤液A中加入琼脂18～22g，用小火加热，不断用玻璃棒搅拌，直到琼脂全部溶解后再用纱布过滤一次，得滤液B。将滤液B倒入量杯内，加 热水补到1000ml，加入葡萄糖20g，搅拌融化，然后趁热快速分装于18mm*180mm或20mm*200mm的试管中，一般装入量为其总长的1/5～1/4。 ③将滤液B中倒入量杯内，加热水补到1000ml，加入葡萄糖20g，搅拌溶化得溶液C。 ④然后将溶液C趁热快速分装于18mm*180mm或20mm*200mm的试管中，一般装入量为其总长的1/5～1/4。分装时，应尽量注意不要使培养基粘附 于管口壁上，如有则用干净纱布擦去，为了避免培养基粘附于管口壁上，可使用分装器进行分装。 ⑤分装完毕后，塞上棉塞，棉塞要求松紧适度。棉塞的长约3cm，一般塞入长度约为棉塞总长度的三分之二。 ⑥棉塞塞好后，把试管扎成几捆，其棉塞部分用油纸或牛皮纸包扎好，竖直放入高压锅内，在1.1kg/cm2压力121℃条件下灭菌30分钟。 ⑦灭菌后，待培养基温度下降到60℃时，再摆成斜面，以防冷凝水积聚过多。摆成斜面时，先在桌面上 放置一根厚度约为1.5cm的木板,将试管 逐支斜放于木板上,使斜面长度不超过试管总长度的1/2,冷却凝固后,即成斜面培养基。灭菌后的斜面培养基在使用前应进行无菌检查，即以制 备的培养基中取3～5支,放置于30℃的恒温箱中培养3天，如培养基表面仍然光滑，无杂菌出现，就可移入4℃冰箱中保存备用。 （二）母种转管技术 1、取原母种管划段：在酒精灯火焰旁，用接种锄将原来的母种试管划段，每段0.5cm。 2、取原母种一小块接入新鲜培养基：打开新鲜培养基试管用接种铲取一小块(0.5cm *0.2cm)组织，迅速放入新鲜培养基试管斜面的中央，塞上棉 塞。 3、培养：把接种后的新鲜培养基试管放在无光、23℃左右进行培养,直至长满菌丝。 注意: a.接种用具灭菌并稍。B.转管总次数不超过5次。C.一支母种可转管30～50支母种