6分光光度技术 6.1基本原理 利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱,利用此吸收光谱对 物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法,称为分光光度法或分光光度技术,使 用的仪器称为分光光度计,这种分光光度计灵敏度高,测定速度快,应用范围广,其 中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。因此 本章重点讨论紫外/可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用 1.光谱: 光是电磁波,可用波长“”表示,电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所 组成,对于生物化学来说,最重要的波长区域是可见光和紫外光 光的波长是二个相邻的波峰之间的距离 光的传播是由相互垂直的电场分量“E”和磁场分量“H”所构成 A=C/v λ一—波长C——一光速V一频率,单位时间通过一个定点的波数。 光又可以看作是由具有能量的粒子所组成。这些粒子所具有的原能量“E”由下 式算出: H—普朗克常数(6.624×10-27尔格·秒) 频率 紫外区可分为紫外(近紫外)和真空紫外(远紫外)。由于吸收池(又称样品 池、比色杯等)和光学元件以及氧气能吸收小于190nm波长的光,因此常规紫外测定 集中在近紫外区,即200nm~400nm。可见光区为400nm~800nm 组成物质的分子均处于一定能态并不停地运动着,分子的运动可分为平动、转 动、振动和分子内电子的运动,每种运动状态都处于一定的能级,因此分子的能量可 以写成: E=E0+E平+E转+E握+E电 Eo是分子内在的不随分子运动而改变的能量,平动能E平只是温度的函数,因此 与光谱有关的能量变化是分子的转动能量、振动能量和分子的电子能量。 128128 6 分光光度技术 6.1 基本原理 利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对 物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术，使 用的仪器称为分光光度计，这种分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，其 中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。因此 本章重点讨论紫外/可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用 等。 1. 光谱： 光是电磁波，可用波长“λ”表示，电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所 组成，对于生物化学来说，最重要的波长区域是可见光和紫外光。 光的波长是二个相邻的波峰之间的距离。 光的传播是由相互垂直的电场分量“E”和磁场分量“H”所构成。 λ＝C/ν λ——波长 C——光速 ν——频率，单位时间通过一个定点的波数。 光又可以看作是由具有能量的粒子所组成。这些粒子所具有的原能量“E”由下 式算出： E＝h·ν H——普朗克常数（ 6.624×10-27 尔格·秒） ν——频率 紫外区可分为紫外（近紫外）和真空紫外（远紫外）。由于吸收池（又称样品 池、比色杯等）和光学元件以及氧气能吸收小于 190nm 波长的光，因此常规紫外测定 集中在近紫外区，即 200nm～400nm。可见光区为 400nm～800nm。 组成物质的分子均处于一定能态并不停地运动着，分子的运动可分为平动、转 动、振动和分子内电子的运动，每种运动状态都处于一定的能级，因此分子的能量可 以写成： E＝E0+E 平+E 转+E 振+E 电 E0 是分子内在的不随分子运动而改变的能量，平动能 E 平只是温度的函数，因此 与光谱有关的能量变化是分子的转动能量、振动能量和分子的电子能量