Vmax=k3 ES]=k3 E] 代入②式:v= Vmax [s]/Km+S] 米氏方程表示Km及Vmax已知时,v[S]的定量关系。 (2)米氏常数的意义 1.Km是酶的一个特性常数,Km大小只与酶性质有关,而与酶浓度无关 当底物确定,反应温度,pH及离子强度一定时,Km值为常数,可用来鉴 别酶。P359表9-1列出一些酶的Km值。一般Km在1×106~10mol 之间。 不同的酶Km值不同,测定Km要在相同测定条件(pH、温度、离子 强度)下进行。 2.Km值可用于判断酶的专一性和天然产物,若一个酶有几种底物就有 几个Km值,其中Kn值最小的底物称为该酶的最适底物,又称天然底物。 3.1/Km可近似表示酶与底物亲和力的大小 真正表示酶与底物亲和力为K=k2/k1,注Km=k2+k3/k) 4.已知Km可由[S]计算v,或由v计算[S] 5.Km可帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 Km小的为主要催化方向(正、逆两方向反应Km不同)。 (3)Vmax和k(kat)的意义 酶浓度[E]一定,则对特定底物Vm为一常数。催化常数kat又称酶 的转化数,数值上与k3同,为酶被底物饱和时,每秒钟每个酶分子转换 底物的分子数。 大多数酶的kcat为1-~104sec,见P322表8-2,为每秒钟酶促反应每 微摩尔酶分子转换底物的微摩尔数。kcat越大,酶催化效率越高 (4)kea/Km的意义: 生理条件下S<Km,Vmax=katE] 得出:v=k/KmE/sy4y 代入米氏方程ⅴ=kaE]S]/Km+[S]=kcaE][S]/Km kat/Km为[E]和S]反应形成产物的表观二级速度常数,单位:L/mols 可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率,见P362表9-4。 ka/Km大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率 (三)米氏常数求法 (1)双倒数法 1/v=Km /Vmax X1/S]+1/vmax 以1/v~1/[S]作图,见P363图910 纵轴截距:1/Vmax;横轴截距:-1/Km:斜率:Km/Vmax。 (2)v-v/Sz (Ead ic-Hofstee ) V=Km×v/[S]+Vmax以y~V/S]作图,见P363图9-1l。 斜率:Km;纵轴截距:Ⅴmax;横轴截距:Ⅴax/Km (3)[S]/v-[S]iE(Hanes-Woolf) [S]/v=Km/Vmax+ 1/Vmax X [SI 以[S]/v~[S]作图,见P363图9-12 斜率:I/V灬欲;纵轴截距:Km/Vma;横轴截距:-Km §29酶的抑制作用Vmax = k3 [ES] = k3 [E] 代入②式：v = Vmax [S] / Km + [S] 米氏方程表示 Km 及 Vmax已知时，v~[S]的定量关系。 （2） 米氏常数的意义 1. Km 是酶的一个特性常数，Km大小只与酶性质有关，而与酶浓度无关。 当底物确定，反应温度，pH 及离子强度一定时，Km 值为常数，可用来鉴 别酶。P359 表 9-1 列出一些酶的 Km 值。一般 Km 在 1×10-6~10-1mol/L 之间。 不同的酶 Km 值不同，测定 Km 要在相同测定条件（pH、温度、离子 强度）下进行。 2. Km 值可用于判断酶的专一性和天然产物，若一个酶有几种底物就有 几个 Km 值，其中 Km 值最小的底物称为该酶的最适底物，又称天然底物。 3. 1 / Km 可近似表示酶与底物亲和力的大小。 真正表示酶与底物亲和力为 Ks=k2 / k1 ,(注 Km= k2+k3 / k1)。 4. 已知 Km 可由[S]计算 v，或由 v 计算[S]。 5. Km 可帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 Km 小的为主要催化方向（正、逆两方向反应 Km 不同）。 （3） Vmax 和 k3(kcat)的意义： 酶浓度[E]一定，则对特定底物 Vmax 为一常数。催化常数 kcat 又称酶 的转化数，数值上与 k3 同，为酶被底物饱和时，每秒钟每个酶分子转换 底物的分子数。 大多数酶的 kcat 为 1~104 /sec，见 P322 表 8-2，为每秒钟酶促反应每 微摩尔酶分子转换底物的微摩尔数。kcat 越大，酶催化效率越高。 （4） kcat / Km 的意义： 生理条件下 S << Km， Vmax = kcat [E] 代入米氏方程 v = kcat [E] [S] / Km + [S] = kcat [E] [S] / Km 得出：v = kcat / Km[E][S] kcat / Km 为[E]和[S]反应形成产物的表观二级速度常数，单位：L/mol s。 可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率，见 P362 表 9-4。 kcat / Km 大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。 （三）米氏常数求法： （1） 双倒数法： 1 / v = Km / Vmax×1 /[S] + 1 / Vmax 以 1 / v ~ 1 / [S]作图，见 P363 图 9-10 纵轴截距：1 / Vmax；横轴截距：-1 / Km；斜率：Km / Vmax。 （2）v ~ v / [S]法 （Eadic-Hofstee）： v = -Km×v / [S] +Vmax 以 v ~ v / [S]作图，见 P363 图 9-11。 斜率：-Km；纵轴截距：Vmax；横轴截距：Vmax / Km。 （3）[S] / v ~ [S]法 （Hanes-Woolf）： [S] / v = Km / Vmax + 1 / Vmax×[S] 以[S] / v ~ [S]作图，见 P363 图 9-12 斜率：1 / Vmax；纵轴截距：Km / Vmax；横轴截距：-Km。 §2.9 酶的抑制作用