2甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，所以在分离核酸时，加入乙醇即可使之从 溶液中沉淀出来。 2.分子大小、形状和粘度 大多数DNA为线形分子，分子极不对称，其长度可以达到几个厘米，而分子的直径 只有2nm。因此DNA溶液的粘度极高。RNA溶液的粘度要小得多。 3.沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形、开环、超螺旋结构） 蛋白质及其他杂质，在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超 离心法纯化核酸或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA分离常用蔗糖梯度。 分离DNA时用得最多的是氯化梯度。氯化铯在水中有很大溶解度，可以制成浓度很高 (80mol/L)的溶液。 应用非棕隙红一氯化输密度梯度平衡超离心、，很容易将 不同构象的DNA、RNA及蛋白质分开。这个方法是目前实 石蜡油 验室中纯化质粒DNA时最常用的方法。如果应用垂直转头 每分钟65000r(Beckman L-70超离心机)，只要6h就可以 蛋白质 完成分离工作。但是加果采用角转头，转束为每分钟45000 时，则需3。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以 在紫外光照下显示得一清一楚（如图410）。蛋白质票浮 在最上面，RNA沉淀在底部。超螺旋DNA沉降较快，开环 及线形DNA沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋 RNA DNA区带部位刺入，收集这一区带的DNA。用异戊醇抽提 收集到的DNA以除去染料，然后诱析除去CsC,再用苯 抽提1~2次，即可用乙醇将DNA沉淀出来。这样得到的 DNA有很高的纯度，可供DNA重组、测定序列及限制酶图 图410经染料一氯化铯密 谱等之用。在少数情况下，需要特别纯的DNA时，可以将 度超离心后，质粒DNA及 此DNA样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离 各种杂质的分布 二、凝胶电泳 凝胶电泳可算是当前核酸研究中最常用的方法了。它有简单、快速、灵敏、成本低等优 点。常用的凝胶电泳有琼脂糖(agarose)凝胶电泳和聚丙烯酰胺(polyacrylamide)凝胶电泳， 凝胶电泳可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果，所以分 离效率很高。 1.琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物，电泳的迁移率决定于以下因素 (1)核酸分子大小迁移率与分子量对数成反比： (2)胶浓度迁移率与胶浓度成反比，常用1%的胶分离DNA: -90 －90－ 2-甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，所以在分离核酸时，加入乙醇即可使之从 溶液中沉淀出来。 2．分子大小、形状和粘度 大多数 DNA 为线形分子，分子极不对称，其长度可以达到几个厘米，而分子的直径 只有 2nm。因此 DNA 溶液的粘度极高。RNA 溶液的粘度要小得多。 3．沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形、开环、超螺旋结构）， 蛋白质及其他杂质，在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超 离心法纯化核酸或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA 分离常用蔗糖梯度。 分离 DNA 时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大溶解度，可以制成浓度很高 （80mol／L）的溶液。 应用啡淀嗅红一氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将 不同构象的 DNA、RNA 及蛋白质分开。这个方法是目前实 验室中纯化质粒 DNA 时最常用的方法。如果应用垂直转头， 每分钟 65 000r（Beckman L-70 超离心机），只要 6h 就可以 完成分离工作。但是如果采用角转头，转速为每分钟 45 000r 时，则需 36h。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以 在紫外光照射下显示得一清二楚（如图 4-10）。蛋白质漂浮 在最上面，RNA沉淀在底部。超螺旋 DNA 沉降较快，开环 及线形 DNA 沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋 DNA 区带部位刺入，收集这一区带的 DNA。用异戊醇抽提 收集到的 DNA 以除去染料，然后透析除去 CsCl，再用苯酚 抽提 1～2 次，即可用乙醇将 DNA 沉淀出来。这样得到的 DNA 有很高的纯度，可供 DNA 重组、测定序列及限制酶图 谱等之用。在少数情况下，需要特别纯的 DNA 时，可以将 此 DNA 样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 二、凝胶电泳 凝胶电泳可算是当前核酸研究中最常用的方法了。它有简单、快速、灵敏、成本低等优 点。常用的凝胶电泳有琼脂糖（agarose）凝胶电泳和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶电泳。 凝胶电泳可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果，所以分 离效率很高。 1．琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物，电泳的迁移率决定于以下因素： （1）核酸分子大小 迁移率与分子量对数成反比； （2）胶浓度 迁移率与胶浓度成反比，常用 1％的胶分离 DNA； 图 4-10 经染料—氯化铯密 度超离心后，质粒 DNA 及 各种杂质的分布