4) H20 6 ul 引物 2 ul Sequence Buffer 2 ul 65℃2min,在室温下10-30min内逐渐降至室温。 5)其间，标记4管： G A TC,加入： Dideoxy Termination Mix ddG ddA ddT ddC 2.5 2.5 2.52.5 (ul) 放于一侧。于前管加入： 6)0.1MDTT 1ul 稀释的Labeling Mix（1:4H2O) 2 ul a[3S]dATP 1 ul 稀释的Sequenase 2 ul 混匀（避免气泡），室温下放置5min