在透析袋处理过程中，EDTA和NaHCO,起何作用？ (二)凝胶过滤 一.目的 学习凝胶过滤的基本操作技术，了解凝胶过滤脱盐的原理和应用。 二.原理 凝胶过滤的主要装置是填充有凝胶颗粒的层析柱。目前使用较多的凝胶有葡聚糖凝 胶(Sephadex)、琼脂糖凝胶(Sepharose)和聚丙烯酰胺凝胶(Bio-gel-P)等。这些多 聚高分子材料，通过适当浓度的交联剂作用即产生分子间横向的交联，形成具有一定孔径 的网络结村 用这类材料制成粒状凝胶颗粒后 就形成 中三维网状结构 这些凝胶材料是高度亲水的，在水溶液里吸水显著膨胀。实际工作中常用每克干胶吸水 量(ml)的10倍(G值)表示凝胶的交联度，可根据被分离物质分子的大小和工作目 的，选择适合的凝胶型号。 当在柱项加上分子大小不同的混合物并用洗脱液洗脱时，自由通诱的小分子可以进 入胶粒内部，而受排阻的大分子不能进入胶粒内部。二者在洗脱过程中走过的路程差别 较大，大分子只能沿着胶粒之间的间隙向下流动，所经路程短，最先流出。而渗入胶料 内部的小分子受迷宫效应影响，要经过层层扩散向下流动，所经路程长，最后流出。通 透性居中的分子则后于大分子而先于小分子流出。从而按由大到小的顺序实现大小分子 分离。 凝胶过滤的操作条件温和，适于分离不稳定的化合物：凝胶颗粒不带电荷，不与被 分离物质发生反应，因而溶质回收率接近100%，而且设备简 、分离效果好、重现性 好，凝胶柱可反复使用，所以广泛使用于蛋白质等大分子的分离纯化、分子量测定、浓 缩、脱盐等用途。本实验利用凝胶过滤的特点，将NH)2SO4盐同蛋白质分子分离开。 三仪器、试剂、材料 1.仪器 层析柱（中2cm×15cm);真空泵：真空干燥器：恒流泵：核酸蛋白检测仪：部分收集 器：记录仪。 2试剂 1%氯化钡溶液：疏酸铵粉末：Sephadex G-25。 3.材料 鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤 四.操作方法 1.凝胶溶张：取5 g Sephadex G-25.加200ml蒸貔水充分溶胀（在室温下约需6小时 或在沸水浴中溶胀5小时)。待溶胀平衡后，用倾泻法除去细小颗粒，在加入与凝 胶等体积的蒸馏 ，在真空干燥器中减压除 气，准备装柱 2.装柱：将层析柱垂直固定，旋紧柱下端的螺旋夹，加入14柱长的蒸馏水。把处理 好的凝胶连同适当体积的蒸馏水用玻棒搅匀，然后边搅拌边倒入柱中，同时开启螺 旋夹控制一定流量。最好一次连续装完所需的凝胶，若分次装入，需用玻棒轻轻搅 在透析袋处理过程中， EDTA 和 NaHCO3 起何作用？ （二）凝胶过滤 一. 目的 学习凝胶过滤的基本操作技术，了解凝胶过滤脱盐的原理和应用。 二. 原理 凝胶过滤的主要装置是填充有凝胶颗粒的层析柱。目前使用较多的凝胶有葡聚糖凝 胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）和聚丙烯酰胺凝胶（Bio-gel-P）等。这些多 聚高分子材料,通过适当浓度的交联剂作用即产生分子间横向的交联，形成具有一定孔径 的网络结构。当用这类材料制成粒状凝胶颗粒后，颗粒内部就形成一种三维网状结构。 这些凝胶材料是高度亲水的，在水溶液里吸水显著膨胀。实际工作中常用每克干胶吸水 量（ml）的 10 倍（G 值）表示凝胶的交联度，可根据被分离物质分子的大小和工作目 的，选择适合的凝胶型号。 当在柱顶加上分子大小不同的混合物并用洗脱液洗脱时，自由通透的小分子可以进 入胶粒内部，而受排阻的大分子不能进入胶粒内部。二者在洗脱过程中走过的路程差别 较大，大分子只能沿着胶粒之间的间隙向下流动，所经路程短，最先流出。而渗入胶粒 内部的小分子受迷宫效应影响，要经过层层扩散向下流动，所经路程长，最后流出。通 透性居中的分子则后于大分子而先于小分子流出。从而按由大到小的顺序实现大小分子 分离。 凝胶过滤的操作条件温和，适于分离不稳定的化合物；凝胶颗粒不带电荷，不与被 分离物质发生反应，因而溶质回收率接近 100％，而且设备简单、分离效果好、重现性 好，凝胶柱可反复使用，所以广泛使用于蛋白质等大分子的分离纯化、分子量测定、浓 缩、脱盐等用途。本实验利用凝胶过滤的特点，将(NH4)2SO4 盐同蛋白质分子分离开。 三. 仪器、试剂、材料 1. 仪器 层析柱（ф2cm×15cm）;真空泵；真空干燥器；恒流泵；核酸蛋白检测仪；部分收集 器；记录仪。 2. 试剂 1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；Sephadex G-25。 3. 材料 鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按 1：20 混匀，然后用六层纱布过滤。 四. 操作方法 1. 凝胶溶胀：取 5 g Sephadex G-25, 加 200ml 蒸馏水充分溶胀（在室温下约需 6 小时 或在沸水浴中溶胀 5 小时）。待溶胀平衡后，用倾泻法除去细小颗粒，在加入与凝 胶等体积的蒸馏水，在真空干燥器中减压除气，准备装柱。 2. 装柱：将层析柱垂直固定，旋紧柱下端的螺旋夹，加入 1/4 柱长的蒸馏水。把处理 好的凝胶连同适当体积的蒸馏水用玻棒搅匀，然后边搅拌边倒入柱中，同时开启螺 旋夹控制一定流量。最好一次连续装完所需的凝胶，若分次装入，需用玻棒轻轻搅