实验十一蛋白质脱盐 (透析和凝胶过滤) 在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋 白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条 件和要求选用。 (一)蛋白质透析 一.目的 学习透析的基本原理和操作。 二原理 蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质 的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三仪器、试剂、材料 1.仪器 烧杯：玻棒：离心机：离心管：冰箱：电炉。 2.试剂 1%氯化钡溶液：疏酸铵粉末：1 mol/L EDTA:2%NaHCO,。 3材料 透析管（宽约2.5cm,长12-15cm)或玻璃纸皮筋：鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清 与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。 四操作方法 1,透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1 mol/L EDTA溶液中，煮 沸10分钟，再在2%NaHC0:溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分 钟即可 2.取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在4℃下静 置20分钟，出现絮状沉淀。 3.离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。 4.装透析管：离心后倒掉上清夜，加5m蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中， 扎紧上口 51 装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。 6.每隔适当时间(5一10分钟)，用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。 五结果处理 记录并解释实验现象 六注意事项 1,硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。 七思考题实验十一 蛋白质脱盐 (透析和凝胶过滤) 在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐，即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋 白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法，可根据实验条 件和要求选用。 （一）蛋白质透析 一.目的 学习透析的基本原理和操作。 二. 原理 蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质 的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三. 仪器、试剂、材料 1. 仪器 烧杯；玻棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。 2. 试剂 1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。 3. 材料 透析管（宽约 2.5cm，长 12－15cm）或玻璃纸;皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清 与水按 1：20 混匀，然后用六层纱布过滤。 四. 操作方法 1. 透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在 1mol/L EDTA 溶液中，煮 沸 10 分钟，再在 2％ NaHCO3 溶液中煮沸 10 分钟，然后再在蒸馏水中煮沸 10 分 钟即可。 2. 取 5ml 蛋白质溶液于离心管中，加 4g 硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。然后在 4℃下静 置 20 分钟，出现絮状沉淀。 3. 离心：将上述絮状沉淀液以 1000 转/分的速度离心 20 分钟。 4. 装透析管：离心后倒掉上清夜，加 5ml 蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中， 扎紧上口。 5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。 6. 每隔适当时间（5－10 分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。 五. 结果处理 记录并解释实验现象。 六. 注意事项 1. 硫酸铵盐一定要充分溶解，才能使蛋白质沉淀下来。 七. 思考题