延伸阅读2-5PCR反应合成目的DNA示例 PCR扩增技术也称为聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),是以DNA变性、复制的某些特性为原理设 计的，可从痕量的DNA样品中特异快速扩增某一区域的DNA片段。通过PCR技术获取所需要的特异DNA片段 在实际应用中用得非常多，但是前提条件是必须对目的基因有一定的了解，通过目的基因序列设计相应的引物序列。 在微量离心管中，加入待扩增的DNA片段两端互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA模板、4种dNTP为 底物，耐热Tag DNA聚合酶等，在高温下使DNA双链解旋变性，然后降低温度，以单链DNA为模板，引物与模 板结合，形成部分双链：再升温至合适温度，以dNTP为原料，在Tag DNA聚合酶的催化下，引物沿5'→3方向延 伸，形成新的DNA片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此循环往复，使目的DNA得以迅速扩增。例如： 【实验目的】体外获得人α-乳白蛋白质基因片段 【实验原理】通过PCR方法从人类基因组DNA中扩增人a-乳白蛋白质基因。 【实验试剂与器材】①器材：PCR反应管，微量移液器，PCR仪等：②人基因组DNA,PCR反应buffer,dNTP (四种脱氧核糖核酸混合液)，Taq聚合酶，上游引物：5'-ATGCTTCCATTTCAGGTTCT-3':下游引物： 5'-CAGTGTCCACCTACTCATCG-3',双蒸水. 【实验方法与步骤】①根据GeneBank上人a-乳白蛋白质DNA序列(GeneBank Acession No.AC000055),利用 引物设计软件设计一对特异性引物，预期扩增片段长度为2446bp。②在PCR反应管中依次加入4l5×Primer反应 buffer,1.6 ul dNTP Mixture(2.5mmol/L),1l(约100ng)人基因组DNA,上下游引物各0.6l,0.2l的Prime HS Taq, 加入双蒸水至20l。反应程序：98℃变性10s,56℃退火10s,72℃延伸2min30s,进行35个循环。③由此扩 增获得的DNA片段即为人a-乳白蛋白质基因。 利用PCR技术可以大量扩增包括目的基因在内的DNA特定靶序列，但在某些情况下，PCR扩增产物仍需要克 隆在受体细胞中，如目的基因的高效表达以及永久保存等。当目的基因或目的基因组过长，用Taq DNA聚合酶难 以一次扩增时，通常采用分段扩增的方法，以I~2kb为一个扩增单位，然后将多个扩增DNA片段拼接成全长基 因。PCR技术不仅能扩增两段已知序列之间的DNA区域，而且还可克隆一段已知序列两侧的DNA片段，所用方 法称为染色体步移(genome walking)和LA PCR(linker-adaptor PCR)。7 延伸阅读 2-5 PCR 反应合成目的 DNA 示例 PCR 扩增技术也称为聚合酶链式反应（polymerase chain reaction），是以 DNA 变性、复制的某些特性为原理设 计的，可从痕量的 DNA 样品中特异快速扩增某一区域的 DNA 片段。通过 PCR 技术获取所需要的特异 DNA 片段 在实际应用中用得非常多，但是前提条件是必须对目的基因有一定的了解，通过目的基因序列设计相应的引物序列。 在微量离心管中，加入待扩增的 DNA 片段两端互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的 DNA 模板、4 种 dNTP 为 底物，耐热 Taq DNA 聚合酶等，在高温下使 DNA 双链解旋变性，然后降低温度，以单链 DNA 为模板，引物与模 板结合，形成部分双链；再升温至合适温度，以 dNTP 为原料，在 Taq DNA 聚合酶的催化下，引物沿 5’→3’方向延 伸，形成新的 DNA 片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此循环往复，使目的 DNA 得以迅速扩增。 例如： 【实验目的】体外获得人ɑ-乳白蛋白质基因片段 【实验原理】通过 PCR 方法从人类基因组 DNA 中扩增人ɑ-乳白蛋白质基因。 【实验试剂与器材】① 器材：PCR 反应管，微量移液器，PCR 仪等；② 人基因组 DNA，PCR 反应 buffer，dNTP （ 四 种 脱 氧 核 糖 核 酸 混 合 液 ）， Taq 聚 合 酶 ， 上 游 引 物 ： 5’-ATGCTTCCATTTCAGGTTCT-3’ ； 下 游 引 物 ： 5’-CAGTGTCCACCTACTCATCG-3’，双蒸水。 【实验方法与步骤】① 根据 GeneBank 上人ɑ-乳白蛋白质 DNA 序列（GeneBank Acession No. AC000055），利用 引物设计软件设计一对特异性引物，预期扩增片段长度为 2 446 bp。② 在 PCR 反应管中依次加入 4 μl 5×Primer 反应 buffer，1.6 μl dNTP Mixture (2.5 mmol/L)，1 μl（约 100 ng）人基因组 DNA，上下游引物各 0.6 μl，0.2 μl 的 Prime HS Taq， 加入双蒸水至 20 μl。反应程序：98 OC 变性 10 s，56 OC 退火 10 s，72 OC 延伸 2 min 30 s，进行 35 个循环。③ 由此扩 增获得的 DNA 片段即为人ɑ-乳白蛋白质基因。 利用 PCR 技术可以大量扩增包括目的基因在内的 DNA 特定靶序列，但在某些情况下，PCR 扩增产物仍需要克 隆在受体细胞中，如目的基因的高效表达以及永久保存等。当目的基因或目的基因组过长，用 Taq DNA 聚合酶难 以一次扩增时，通常采用分段扩增的方法，以 1～2 kb 为一个扩增单位，然后将多个扩增 DNA 片段拼接成全长基 因。PCR 技术不仅能扩增两段已知序列之间的 DNA 区域，而且还可克隆一段已知序列两侧的 DNA 片段，所用方 法称为染色体步移（genome walking）和 LA PCR（linker-adaptor PCR）