到多种蛋白质。 (二)、有机酸沉淀蛋白质: 取一支试管,加入蛋白质溶液znl,再加λ1ml5%三氯乙酸溶液,振荡试管,观察沉淀 生成。放置片刻,倾出上清夜,向沉淀中加入少量水,观察沉淀是否溶解,并解释。 说明:三氯乙酸是实验室中最常见的蛋白质变性剂。终止酶反应时,除去蛋白质对测 定的干扰时,往往用三氯乙酸。此外,磺基水杨酸沉淀蛋白质也很有效。 (三)、有机溶剂沉淀蛋白质 取一支试管,加入2m1蛋白质溶液,再加入2m195%乙醇,混匀,观察沉淀的生 成 (四)、重金属离子沉淀蛋白质; 取一支试管,加入2ml蛋白质溶液,再加入1一2滴3%硝酸银溶液,振荡,观察沉淀生 成。放置片刻,倾去上清夜,加少量水,观察沉淀是否溶解,并解释。 说明:重金属离子与蛋白质结合成盐而沉淀,不再溶解。 (五)、乙醇引起的变性与沉淀 取三支试管,编号,按表5-1顺序加入试剂 表5-1乙醇沉淀试验 试管5卵清蛋白0.1mlL氢0.lmlL盐95乙醇pH4.7缓冲液 溶液(ml)氧化钠m 酸(ml) 0 0 001 0 摇匀后,观察各管变化。放置片刻,向各管内加水8ml,然后在第2,3号管中各加 滴甲基红,分别用乙酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和。观察各管颜色变化和沉淀生成情 况。每管再加0.lmol/L盐酸溶液数滴,观察沉淀溶解情况。解释各管毎步试验现象 四、思考题 1、酒精消毒的原理是什么?为什么用75%乙醇消毒而不用无水乙醇? 2、鸡蛋清可作为铅中毒或汞中毒的解毒剂,机理是什么 实验七蛋白质的颜色反应 1.目的要求 (1)学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理 (2)学习和了解一些鉴定氨基酸的特殊颜色反应及其原理 2.原理 (1)双缩脲反应当尿素加热到180℃左右时,2分子尿素发生缩合放出1分子氨而形成双 缩脲。双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物,这一呈色反应称为双缩 脲 反应 NH NH, CO+ C-O-180TH2N CNHC-NH2+NH3 尿素 双缩脲到多种蛋白质。 (二)、有机酸沉淀蛋白质： 取一支试管，加入蛋白质溶液 2ml，再加入 1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀 生成。放置片刻，倾出上清夜，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解，并解释。 说明：三氯乙酸是实验室中最常见的蛋白质变性剂。终止酶反应时，除去蛋白质对测 定的干扰时，往往用三氯乙酸。此外，磺基水杨酸沉淀蛋白质也很有效。 (三)、有机溶剂沉淀蛋白质： 取一支试管，加入 2ml 蛋白质溶液，再加入 2ml95%乙醇，混匀，观察沉淀的生 成。 (四)、重金属离子沉淀蛋白质； 取一支试管，加入 2ml 蛋白质溶液，再加入 1－2 滴 3%硝酸银溶液，振荡，观察沉淀生 成。放置片刻，倾去上清夜，加少量水，观察沉淀是否溶解，并解释。 说明：重金属离子与蛋白质结合成盐而沉淀，不再溶解。 (五)、乙醇引起的变性与沉淀： 取三支试管，编号，按表 5－1 顺序加入试剂。 表 5－1 乙醇沉淀试验 试管 号 5%卵清蛋白 溶液(ml) 0.1mol/L 氢 氧化钠(ml) 0.1mol/L 盐 酸(ml) 95%乙醇 (ml) pH4.7 缓冲液 (ml) 1 1 0 0 1 1 2 1 1 0 1 0 3 1 0 1 1 0 摇匀后，观察各管变化。放置片刻，向各管内加水 8ml，然后在第 2，3 号管中各加 1 滴甲基红，分别用乙酸溶液及 0.05mol/L 碳酸钠溶液中和。观察各管颜色变化和沉淀生成情 况。每管再加 0.1mol/L 盐酸溶液数滴，观察沉淀溶解情况。解释各管每步试验现象。 四、思考题： 1、酒精消毒的原理是什么？为什么用 75%乙醇消毒而不用无水乙醇？ 2、鸡蛋清可作为铅中毒或汞中毒的解毒剂，机理是什么 实验七 蛋白质的颜色反应 1. 目的要求 （1） 学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。 （2） 学习和了解一些鉴定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。 2. 原理 （1）双缩脲反应 当尿素加热到 180℃左右时，2 分子尿素发生缩合放出 1 分子氨而形成双 缩脲。双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物，这一呈色反应称为双缩 脲 反应