异型细胞表面的 Notch分子胞外区结合,释放具有活性的 Notch胞内区,后者通过与胞浆和 胞核内的相关蛋白结合来调控分化目的基因Su①H、Hes的转录,最终影响细胞分化命运 Notch的生理抑制剂Numb可以阻断其细胞内区向核内的转移。研究发现, Notch信号途径 介导的细胞间相互作用的本质特征在于相邻细胞受、配体的表达不同由同型细胞组成的 细胞群中,使某些细胞定向分化,周围细胞向另一方向分化或保持未分化状态(即侧向分化 或抑制作用);由不同型细胞组成的细胞群中,使细胞进入下一分化阶段(即信号诱导作用)。 目前有限的文献报道8及我们的前期工作1表明,新生大鼠肺发育囊泡期肺泡上皮细胞 和间质细胞高表达 Notch受/配体,其蛋白及mRNA表达水平随胎龄增加而改变。由此推测 Notch信号可能通过调控AECⅡ分化方向在肺发育及早产儿肺损伤中起重要作用, Notch 信号表达异常可能通过上皮/基质相互作用对肺泡上皮细胞转分化及肺损伤修复产生重要影 响 目前,对上皮细胞转分化在发育期肺损伤修复中的作用研究很少,基质调控胎肺AEC Ⅱ转分化的分子机制尚有待进一步研究。国际上有关 Notch信号转导通路调控发育的报道 主要限于淋巴细胞和脑组织细胞分化的研究,而对其调控肺泡上皮细胞转分化的机制及在 早产儿肺损伤中作用尚无人涉及 在早产儿肺损伤研究领域,本室已开展一系列工作,成功建立了高氧所致早产大鼠急、 慢性肺损伤的动物模型,掌握了支气管肺泡灌洗术、体外胎肺肺泡Ⅱ型细胞和成纤维细胞 培养田以及其他相关的分子生物学和免疫细胞化学技术,并对细胞因子、抗氧化酶、 氧化氮、转化生长因子β、细胞外基质中MPs/TIMP(基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶 抑制剂)平衡等因素在高氧肺损伤发病机制中所起的作用进行了较深入研究,同时应用地 塞米松、人类重组促红细胞生成素、银杏叶提取物(EGb761)进行了抗氧化损伤的干预 研究。晚近已完成 Notch信号在大鼠胎肺组织表达的预实验。上述前期工作为从分子水 平探讨早产儿肺损伤发生机制奠定了基础 据此,本研究提出如下假设:1.体外同型细胞培养时AEC转分化为AECI;不 同型细胞(AECⅡ+成纤维细胞)共培养时抑制AECI转分化;2.细胞外基质抑制AEC 工转分化主要通过 Notch信号调控 本项目内容如能按预期完成,将深化对 Notch信号通路调控AECⅡ转分化分子机制 的认识并可能为早产儿肺损伤的防治开拓新思路和提供理论依据。 2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题 研究目标: 阐明胎肺细胞外基质是否对AECⅡ一AECI间可逆转分化起决定作用:阐明 Notch 受/配体信号在基质对胎肺AECⅡ体外转分化的调控机制中是否起关键作用,以期初步异型细胞表面的 Notch 分子胞外区结合，释放具有活性的 Notch 胞内区，后者通过与胞浆和 胞核内的相关蛋白结合来调控分化目的基因 Su(H)、Hes 的转录，最终影响细胞分化命运。 Notch 的生理抑制剂 Numb 可以阻断其细胞内区向核内的转移。研究发现，Notch 信号途径 介导的细胞间相互作用的本质特征在于相邻细胞受、配体的表达不同[6] :由同型细胞组成的 细胞群中，使某些细胞定向分化，周围细胞向另一方向分化或保持未分化状态（即侧向分化 或抑制作用）；由不同型细胞组成的细胞群中，使细胞进入下一分化阶段（即信号诱导作用）。 目前有限的文献报道[7，8]及我们的前期工作[9，10]表明，新生大鼠肺发育囊泡期肺泡上皮细胞 和间质细胞高表达 Notch 受/配体，其蛋白及 mRNA 表达水平随胎龄增加而改变。由此推测， Notch 信号可能通过调控 AECⅡ分化方向在肺发育及早产儿肺损伤中起重要作用，Notch 信号表达异常可能通过上皮/基质相互作用对肺泡上皮细胞转分化及肺损伤修复产生重要影 响。 目前，对上皮细胞转分化在发育期肺损伤修复中的作用研究很少，基质调控胎肺 AEC Ⅱ转分化的分子机制尚有待进一步研究。国际上有关 Notch 信号转导通路调控发育的报道 主要限于淋巴细胞和脑组织细胞分化的研究，而对其调控肺泡上皮细胞转分化的机制及在 早产儿肺损伤中作用尚无人涉及。 在早产儿肺损伤研究领域，本室已开展一系列工作，成功建立了高氧所致早产大鼠急、 慢性肺损伤的动物模型，掌握了支气管肺泡灌洗术、体外胎肺肺泡Ⅱ型细胞和成纤维细胞 培养[11]以及其他相关的分子生物学和免疫细胞化学技术，并对细胞因子、抗氧化酶、一 氧化氮、转化生长因子β、细胞外基质中 MMPs/TIMP（基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶 抑制剂）平衡等因素在高氧肺损伤发病机制中所起的作用进行了较深入研究，同时应用地 塞米松、人类重组促红细胞生成素、银杏叶提取物（EGb761）进行了抗氧化损伤的干预 研究。晚近已完成 Notch 信号在大鼠胎肺组织表达的预实验。上述前期工作为从分子水 平探讨早产儿肺损伤发生机制奠定了基础。 据此，本研究提出如下假设：1．体外同型细胞培养时 AECⅡ转分化为 AECＩ；不 同型细胞（AECⅡ+成纤维细胞）共培养时抑制 AECⅡ转分化；2．细胞外基质抑制 AEC Ⅱ转分化主要通过 Notch 信号调控。 本项目内容如能按预期完成，将深化对 Notch 信号通路调控 AECⅡ转分化分子机制 的认识并可能为早产儿肺损伤的防治开拓新思路和提供理论依据。 2、项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题 研究目标： 阐明胎肺细胞外基质是否对 AECⅡ—AECⅠ间可逆转分化起决定作用；阐明 Notch 受/配体信号在基质对胎肺 AECⅡ体外转分化的调控机制中是否起关键作用，以期初步