鸟枪法克隆目的基因的基本战略 染色体DNA的切断 超声波处理:片段长度均一,大小可控,平头末端 全酶切 片段长度不均一,粘性末端便于连接,但有可能使目的基因断开, 大小不可控 部分酶切:片段长度可控,含有粘性末端,目的基因完整 与载体连接 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切图谱法筛选,则选择多拷贝克隆载 体;如果转化子采用基因产物功能检测法筛选,则选择表达型载体 转化受体细胞 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切图谱法筛选,则选择大肠杄菌作 受体细胞;如果转化子采用基因产物功能检测法筛选,则选择能使目的基因表达 的受体细胞 筛选含有目的基因的目的重组子 菌落原位杂交法、基因产物功能检测法(筛选模型的建立)鸟枪法克隆目的基因的基本战略 鸟枪法克隆目的基因的基本战略 染色体 染色体DNA DNA的切断 的切断 超声波处理： 超声波处理：片段长度均一，大小可控，平头末端 片段长度均一，大小可控，平头末端 全酶切： 全酶切： 片段长度不均一，粘性末端便于 片段长度不均一，粘性末端便于连接，但有可能使目的基因断开， 连接，但有可能使目的基因断开， 大小不可控 大小不可控 部分酶切： 部分酶切： 片段长度可控，含有粘性末端，目的基因完整 片段长度可控，含有粘性末端，目的基因完整 与载体连接 与载体连接 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切图谱法筛选，则选择多拷贝克隆载 图谱法筛选，则选择多拷贝克隆载 体；如果转化子采用基因产物功能检 体；如果转化子采用基因产物功能检测法筛选，则选择表达型载体 测法筛选，则选择表达型载体 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切图谱法筛选，则选择大肠杆菌作 为 如果转化子采用菌落原位杂交法或限制性酶切图谱法筛选，则选择大肠杆菌作 为 转化受体细胞 转化受体细胞 受体细胞；如果转化子采用基因产物功能检测 受体细胞；如果转化子采用基因产物功能检测法筛选，则选择能使目的基因表达 法筛选，则选择能使目的基因表达 的受体细胞 的受体细胞 筛选含有目的基因的目的重组子 筛选含有目的基因的目的重组子 菌落原位杂交法、基因产物功能检测法（筛选模型的建立） 菌落原位杂交法、基因产物功能检测法（筛选模型的建立）