迅速混匀各管，然后在46Ourn比色，光径1cm。 (4)标准曲线的制作，按下表进行。 管号 12 3 456 0.005mol/L(NH4)2SOa(ml) 00.1 0.2 0.3 0.40.5 加蒸馏水(ml) 10 9.9 9.8 9.7 9.69.5 10%酒石酸钾钠ml) 各0.5 0.5mol/LNaOH (ml) 各0.5 奈氏试剂(ml) 各1 五、结果处理 在标准曲线上查出脲酶作用于不同浓度脲液生成碳酸胺的量，然后取单位时 间生成碳酸铵量的倒数即1/V为纵坐标，以对应的脲液浓度的倒数即1/(S)为 横坐标作双倒数图，求出Km值。 六、注意事项 (1)准确控制各管酶反应时间尽量一致。 (2)按表中顺序加入各种试剂。 (3)奈氏试剂腐蚀性强，勿洒在试管架和实验台面上。 七、思考题 除了双倒数作图法，还有哪些方法可求得Km值？ 参考文献 陈破垄，生物化学研究技术。北京：中国农业出版社，1995 郑洪元，张德生。土壤动态生物化学研究法。北京：科学出版社，1982 迅速混匀各管，然后在 460urn 比色，光径 1cm。 （4）标准曲线的制作，按下表进行。 管 号 1 2 3 4 5 6 0.005mol/L(NH4)2SO4(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 加蒸馏水（ml） 10 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 10%酒石酸钾钠(ml) 各 0.5 0.5mol/LNaOH（ml） 各 0.5 奈氏试剂（ml） 各 1 五、结果处理 在标准曲线上查出脲酶作用于不同浓度脲液生成碳酸胺的量，然后取单位时 间生成碳酸铵量的倒数即 1／V 为纵坐标，以对应的脲液浓度的倒数即 1/〔S〕为 横坐标作双倒数图，求出 Km 值。 六、注意事项 （1）准确控制各管酶反应时间尽量一致。 （2）按表中顺序加入各种试剂。 （3）奈氏试剂腐蚀性强，勿洒在试管架和实验台面上。 七、思考题 除了双倒数作图法，还有哪些方法可求得 Km 值？ 参考文献 陈破垄，生物化学研究技术。北京：中国农业出版社，1995 郑洪元，张德生。土壤动态生物化学研究法。北京：科学出版社，1982