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(二)免疫佐剂:免疫佐剂的枢念。佐剂的种类(如细胞因子、卡介苗、氢氧化铝、胞苷酸、液体石蜡和羊毛 脂等),佐剂的生物学作用:佐剂的作用机制。 (三)多克隆抗体的制备及应用:动物的选择(抗原与动物种屈间的关系、动物的个生因素、抗原性质与动物 种类、抗体用量和要求),抗原剂量的选择,免疫程序,采血方法,抗血清的鉴定及保存(效价与纯度、特异性、 亲和力、保存),抗体的纯化(盐析法、离子交换层析法、亲和层析法和吸附法等),多克隆抗体的特性和应用。 (四)单克隆抗体的制各及应用:杂交瘤技术的基本原理,杂交瘤细胞的制名过程,单克隆抗体的生产,单克 隆抗体纯化,单克隆抗体鉴定,单克降抗体的特性,单克隆抗体的应用。 (五)基因工程抗体及应用:基因工程抗体橱念,人源化抗体(人-服嵌合抗体、CR植入抗体),小分子抗体 (抗原结合片段Fab、可变区片段Fv、重链抗体b),双特异抗体(双特异抗体分子的构建和应用),抗体融合 蛋白(含Fab段或Fv段的、含F©的抗体融合蛋白),噬菌体抗体库技术(概念、噬菌体抗体库、天然抗体库、免疫 拉体库、合成拉体,重组多克摩抗体, 基因工程抗体的应用(肿瘤治疗、肿瘤影像分析、抗感染、细胞内抗 体、临床诊断)。 第四章标记物及其与抗原抗体的结合物制备 一教学目的 通过本章理论学习,了解各种标记物的特性和标记物与特异抗原或抗体交联成结合物的制备技术。标记物是高 灵敏免疫测定的物质基础,而结合物则是标记免疫测定试剂的核心组分。 二教学要求 1.学握常见的标记物及其特性:常见标记物与抗原抗体结合物制备基本方法:常见的双功能交联试剂及其特 性。标记物、荧光底物、酶活性单位 三价稀土离子、酶促化学发光剂、电化学发光剂、量子点、间接偶联、胶体 金、双功能交联试剂法的概念。 2.熟悉标记物与抗体原抗体结合物的鉴定、纯化与保存:常见标记方法的原理 3.了解量子点的制备方法与表面修饰:胶体金的制备。 三教学内容 (一)标记物的种类及特性:放射性核素:荧光物质(荧光者如EITC200、PE、TRITC,稀士离子,其他如 4-甲基伞酮-B-D-半乳糖苷等);酶和酶作用底物(常用酶如R即、ALP、B-半乳糖苷酶,常用酸作用底物如RP的 底物OPD、TB、AEC、HPA,ALP的底物PP、BCIP/NBT、4-P,B-Gal的底物4-UG):化学发光剂(直接的有吖啶 酯和三联此啶钉,睡保反应的有鲁米诺及衍生物和APP):量子点(制备及表面修饰):胶体金(制备原理及方 法)。 (二)常用的交联剂及特性:均一的双功能交联剂(磁二亚胺缩合法戊二醛法过碘酸盐氢化法、-羟琥珀 亚酰胺活化法),非均一的双功能交联剂。 (三)放射性核素与抗原抗体的结合物制备:基本方法,放射性核素标记结合物的纯化、鉴定及保存。 (四)荧光素与抗原抗体的结合物制备:基本方法(搅拌法、透析法),荧光素标记结合物的纯化(透析法、 凝胶过滤法),鉴定(荧光素与蛋白质的结合率、抗体效价和特异性)及保在。 (五)酶与抗原抗体的结合物制备:基本方法(戊二醛交联法改良过碘酸钠法),标记结合物的纯化、鉴 定及保在 (六)化学发光剂与抗原抗体的结合物制备:基本方法,化学发光剂标记结合物的纯化。鉴定及保在 (七)稀土离子与抗原抗体的结合物制备:基本方法,稀土离子标记结合物的纯化、鉴定及保在
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