025%溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF Ⅲ 4℃ 30%甘油水溶液 025%溴酚蓝 ⅣV 40%W/V)蔗糖水溶液 4℃ 碱性加样缓冲液 00mmolL NaoH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖( Ficol40) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度:以确保DNA均匀进入样品孔内:使样品呈现颜 色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动 的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳 动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在 琼脂糖浓度为0.5%~14%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱 性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明 5.各种pH值的Tris缓冲液的配制 各种pH值的Tis缓冲液的配制 所需pH值(25℃) 0.1 molL Hcl的体积 7.1 44.7Ⅲ 0.25%溴酚蓝 4℃ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 Ⅳ 0.25%溴酚蓝 40%(W/V)蔗糖水溶液 4℃ 碱性加样缓冲液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA Ⅴ 18%聚蔗糖(Ficoll400) 4℃ 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均匀进入样品孔内；使样品呈现颜 色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动 的速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳 动速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在 琼脂糖浓度为 0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱 性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 5．各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值（25℃） 0.1mol/L HCl 的体积 7．1 45．7 7．2 44．7 7．3 43．4