实验室常用技术参数资料 核酸及蛋白质常用数据 1.核苷三磷酸的物理常数 1摩尔溶液(pH70)中λmax时的最大吸 合物 Amax(pH7.0) 收值 ATP 507 15400 CTP 483 9000 0.97 523 253 13700 UTP 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 267 9600 0.71 2.常用核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数 分子量 入DNA 48502(双链环状) 3.0×107 BR322 4363(双链) 28×10 28SrRNA 4800 23SrRNA 3700 12×10 8SrrNA 6.1×105 19SrRNA 1700 5SrRNA 36×104 tRNA(大肠杆菌) 2.5×104
实验室常用技术参数资料 一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子 量 λmax(pH7.0) 1 摩尔溶液（pH7.0）中 λmax 时的最大吸 收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2．常用核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数 分子量 λDNA 48502（双链环状） 3.0×107 pBR322 4363（双链） 2.8×106 28SrRNA 4800 1.6×106 23SrRNA 3700 1.2×106 18SrRNA 1900 6.1×105 19SrRNA 1700 5.5×105 5SrRNA 120 3.6×104 tRNA（大肠杆菌） 75 2.5×104
3.常用核酸蛋白换算数据 (1)重量换算 g=10g (2)分光光度换算 1A260双链DNA=50ug/ml 1A260单链DNA=30pgml 1A26单链RNA=40pgml (3)DNA摩尔换算 lgg1 DObp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端 lug pBR322 DNA=0. 36pmol I pmol 1000bp DNA=0.66ug I pmol pBR322=2. 8ug lkb双链DNA(钠盐)=6.6×105道尔顿 lkb单链DNA(钠盐)=3.3×105道尔顿 lkb单链RNA(钠盐)=34×105道尔顿 (4)蛋白摩尔换算 l00pml分子量100,000蛋白质=10pg 100pmol分子量50,000蛋白质=5吗g
3．常用核酸蛋白换算数据 （1）重量换算 1μg=10-6 g 1pg=10-12g 1ng=10-9 g 1fg=10-15g （2）分光光度换算： 1A260 双链 DNA=50μg/ml 1A260 单链 DNA=30μg/ml 1A260 单链 RNA=40μg/ml （3）DNA 摩尔换算： 1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端 1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb 双链 DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿 1kb 单链 DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿 1kb 单链 RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿 （4）蛋白摩尔换算： 100pmol 分子量 100，000 蛋白质=10μg 100pmol 分子量 50，000 蛋白质=5μg
100pmol分子量10,000蛋白质=1g 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 (5)蛋白质/DNA换算 lkb DNA=333个氨基酸编码容量=3.7×0MW蛋白质 10,000w蛋白质=270 bp dna 30,000W蛋白质=810 bp dNA 50,000MW蛋白质=1.35kb 100,000MW蛋白质=27 kb dNa 4.常用蛋白质分子量标准参照物 (1)高分子量标准参照 (2)中分子量标准参照 (3)低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶B 门,400碳酸酐酶 肌球蛋白 212,000 牛血清白蛋白 66,200大豆腱蛋白酶21,500 B-半乳糖甘酶B16,000谷氨酶脱氢酶55,000抑制剂 磷酸化酶B 97,400 卵白蛋白 42,700马心肌球蛋白 16,900 牛血清白蛋白 6,200 醛缩酶 14,400 过氧化氢酶 57,000 碳酸酐酶 31,000肌球蛋白(F1) 8,100 醛缩酶 大豆睫蛋白酶 21,500肌球蛋白(F2)6,200 抑制剂 肌球蛋白(F3)2,500 溶菌酶 14,400
100pmol 分子量 10，000 蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7 道尔顿 （5）蛋白质/DNA 换算： 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW 蛋白质 10，000MW 蛋白质=270bp DNA 30，000MW 蛋白质=810bp DNA 50，000MW 蛋白质=1.35kb 100，000MW 蛋白质=2.7kb DNA 4．常用蛋白质分子量标准参照物 （1）高分子量标准参照 （2）中分子量标准参照 （3）低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶 B 97，400 碳酸酐酶 31，00 肌球蛋白 212，000 牛血清白蛋白 66，200 大豆脻蛋白酶 21，500 β-半乳糖甘酶 B 116，000 谷氨酶脱氢酶 55，000 抑制剂 磷酸化酶 B 97，400 卵白蛋白 42，700 马心肌球蛋白 16，900 牛血清白蛋白 66，200 醛缩酶 40，000 溶菌酶 14，400 过氧化氢酶` 57，000 碳酸酐酶 31，000 肌球蛋白（F1） 8，100 醛缩酶 40，000 大豆脻蛋白酶 21，500 肌球蛋白（F2） 6，200 抑制剂 肌球蛋白（F3） 2，500 溶菌酶 14，400
5.常用DNA分子量标准参照物 ADNA/HindIll 入 DNA/ECOR I Hind+EcoR I BR322/Haelll 2313 21227 587 655 5804 4361 5643 4268 3530 3530 2027 267 1584 213 1375 125 BR322/Hinf I oy174/Hinf I 174HaeⅢl x174/Tap I 1631 726 140 1353 713 l18 1078 872 327 413 3l1
5．常用 DNA 分子量标准参照物 λDNA/HindⅢ λDNA/EcoRⅠ λ/HindⅢ+EcoRⅠ pBR322/HaeⅢ 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 213 21 1375 192 18 974 184 11 831 124 7 564 125 续上表 pBR322/HinfⅠ φχ174/HinfⅠ φχ174/Hae Ⅲ φχ174/TapⅠ 1631 726 140 1353 2914 517 713 118 1078 1175 506 553 100 872 404 396 500 82 603 327 344 417 66 310 231 298 413 48 281 141 221 311 42 271 87
、常用缓冲液 1.分子克隆常用缓冲液 磷酸缓冲 (1)25℃下0.1moL磷酸钾缓冲液的配制 molL KHPOa(ml) I molL KH2PO4(m 91.5 13.2 19.2 27 619 49.7 2 71.7 80.2 90.8
220 249 40 234 54 154 200 24 194 33 75 151 118 20 72 二、常用缓冲液 1．分子克隆常用缓冲液 2．磷酸缓冲液 （1）25℃下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制※ pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.2
(2)25℃下0.lmoL磷酸钠缓冲液的配制 I mol/L Na2HPO4(ml) I mol/L NaH2PO4(ml) 5.8 88.0 7.8 82.2 35.2 46.3 53.7 42.3 8.4 31.6 22.6 89.6 ※用蒸馏水将混合的两种1moL贮存液稀释至1000ml,根据 Henderson- Hasselbalch方程计算其pH pl=pK+lg(质子受体]质子供体 在此,pK 3.电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10moL/L EDTA(pH8.0)
（2）25℃下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制※ pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml) 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 17.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7 7.0 57.7 42.3 7.2 68.4 31.6 7.4 77.4 22.6 7.6 84.5 15.5 7.8 89.6 10.4 8.0 93.2 6.8 ※:用蒸馏水将混合的两种 1mol/L 贮存液稀释至 1000ml，根据 Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH 值： pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体]) 在此，pK’=6.86(25℃)。 3．电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0)
0025%二甲苯青FF 0025%溴酚蓝 甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。不过,一旦略呈黄色, 则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与 Dowex XGs混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理,并用 whatma n1号滤纸过滤2次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃ 常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 贮存液(每升) Tris-乙酸(TAE 1×:0.04mol/ L Tris-乙酸 50×:242 g Tris碱 0.001 mol/L EDTA 57lml冰乙酸 100ml 0.5moIL EDTA(pH8.0) Tris-磷酸(TPE) 1×009 mol/L Tris-磷酸 10×:10 g Tris碱 0.002MoL/L EDTA 15.5m85%磷酸(1.679g/ml) 40ml 0. 5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸(TBE)a 0.5×0.045 mol/ Tris-硼酸 5x:54 g Tris碱 0. 001moIL EDTA 75硼酸 .Oml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b 1×:5 Ammol nah l×:5 ml 10molL NaOH Immol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) -甘氨酸 1×25mmo/ L Tris 5×:15. Ig Tris 250mmoL甘氨酸 94g苷氨酸(电泳级)(pH8.3) 0. 1% SDS 50m10%SDS(电泳级) 说明: BE溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉 淀后则予以废弃
0.025%二甲苯青 FF 0.025%溴酚蓝 甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色， 则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与 Dowex XG8混合床树脂共同搅拌 1 小时进行去离子处理，并用 Whatma n 1 号滤纸过滤 2 次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。 常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 浓贮存液（每升） Tris-乙酸（TAE） 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 50×：242g Tris 碱 0.001mol/L EDTA 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE） 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 碱 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 5×：54g Tris 碱 0.001mol/L EDTA 27.5 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液 b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸 c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris 250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3） 0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级) 说明： ①TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存 5×溶液，出现沉 淀后则予以废弃
以片都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足 够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,故通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1×TBE以 提供足够的缓冲容量 ②碱性电泳缓冲液应现用现配 ③Tis-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 2×SDS凝胶加样缓冲液: 100mmol/L Tris. HCI(6. 8) 200mmoL二硫苏糖醇(DTT) 4%SDS(电泳级) 02%溴酚蓝 20%甘油 不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取1molL贮存液现加于上述缓冲液中 4.凝胶加样缓冲液 缓冲液类型 6×缓冲液 贮存温度 025%二甲苯青FF 40%(W/V)蔗糖水溶液 025溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖( Ficoll400)
以片都以 1×TBE 作为使用液（即 1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但 0.5×的使用液已具备足 够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以 1：10 稀释的贮存液作为使用液。 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用 1×TBE 以 提供足够的缓冲容量。 ②碱性电泳缓冲液应现用现配。 ③Tris-甘氨酸缓冲液用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。 2×SDS 凝胶加样缓冲液： 100mmol/L Tris·HCl(6.8) 200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT） 4%SDS（电泳级） 0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含 DTT 的 2×SDS 凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取 1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。 4．凝胶加样缓冲液 缓冲液类型 6×缓冲液 贮存温度 Ⅰ 0.25%溴酚蓝 4℃ 0.25%二甲苯青 FF 40%（W/V）蔗糖水溶液 Ⅱ 0.25 溴酚蓝 室温 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(Ficoll400)
025%溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF Ⅲ 4℃ 30%甘油水溶液 025%溴酚蓝 ⅣV 40%W/V)蔗糖水溶液 4℃ 碱性加样缓冲液 00mmolL NaoH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖( Ficol40) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度:以确保DNA均匀进入样品孔内:使样品呈现颜 色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动 的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳 动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在 琼脂糖浓度为0.5%~14%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱 性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明 5.各种pH值的Tris缓冲液的配制 各种pH值的Tis缓冲液的配制 所需pH值(25℃) 0.1 molL Hcl的体积 7.1 44.7
Ⅲ 0.25%溴酚蓝 4℃ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 Ⅳ 0.25%溴酚蓝 40%(W/V)蔗糖水溶液 4℃ 碱性加样缓冲液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA Ⅴ 18%聚蔗糖(Ficoll400) 4℃ 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均匀进入样品孔内；使样品呈现颜 色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动 的速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳 动速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在 琼脂糖浓度为 0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱 性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 5．各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值（25℃） 0.1mol/L HCl 的体积 7．1 45．7 7．2 44．7 7．3 43．4
7.4 7.9 8. 26.2 8.4 17.2 12.4 8.9 某一特定pH值的00 mol/L Tris缓冲液的配制:将50mlO. Imol/ Tris碱溶液与上表所示相应体积(单 位:m)的0.1 mI/L HCl混合,加水将体积调至100ml (2)温度对50 mmol/L TrisHCl液pH值的影响 8.2 7.6
7．4 42．0 7．5 40．3 7．6 38．5 7．7 36．6 7．8 34．5 7．9 32．0 8．0 29．2 8.1 26.2 8.2 22.9 8.3 19.9 8.4 17.2 8.5 14.7 8.6 12.4 8.7 10.3 8.8 8.5 8.9 7.0 某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 缓冲液的配制：将 50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与上表所示相应体积（单 位：ml）的 0.1ml/L HCl 混合，加水将体积调至 100ml （2）温度对 50mmol/L Tris·HCl 液 pH 值的影响 4℃ 25℃ 37℃ 8．1 7．5 7．2 8．2 7．6 7．3 8．3 7．7 7．4 8．4 7．8 7．5