4.切除引物，填补缺口，连接修复 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其3'一OH端与前面一条老片段的5'端接近 时，即发生下列变化：在DNA聚合酶的作用下，在引物RNA与DNA片段的连接处切断： 切去RNA引物后留下的空隙，由DNA聚合酶I催化合成一段DNA填补上：在DNA连接酶的 作用下，连接相邻的DNA链：修复掺入DNA链的错配碱基。这样以两条亲代DNA链为模 板，各自形成一条新的DNA互补链，结果是形城了两个DNA双股螺旋分子。每个分子中 条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的，故称为半保留复制。 四、逆转录 以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA,这与通常转录过程中遗传信息流 从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录(reverse transcription)。在20世纪六十年代Temin 根据有关的实验结果提出，由RNA肿瘤病毒逆向转录为DNA前病毒，然后由DNA前病毒 再转录为RNA肿瘤病毒的设想，但当时未得到重视。直至l97O年，Temin和Baltimore各自 在鸟类劳氏肉瘤病毒和小鼠白血病病毒等RNA肿瘤病毒中找到了逆转录酶，才证明了存在 逆向转录过程。现在人们已发现各种高等真核生物的RNA肿瘤病毒都有逆转录酶。鸟类的 劳氏肉瘤病毒的逆转录酶具有三种分子形式，分别为a、āB和B2,其中āB是主要形式。 a亚基分子量为63kDa,B亚基分子量为94kDa。a亚基是B亚基的水解产物。只有a亚 基具有酶活性。哺乳动物的NA肿瘤病毒的逆转录酶一般为单亚基结构。如小鼠白血病病 毒中的逆转录酶是分子量为7OkDa的单条多肽链。逆转录酶需要以RNAM或DNA)为模板， 以四种NTP为原料，要求短链RNA(或DNA)作为引物，此外还需要适当浓度的二价阳离子 Mg2和M2,沿5'→3'方向合成DNA,形成RNA-DNA杂交分子（或DNA双链分子）。以 后，再以RNA-DNA杂交分子中的DNA链为模板，在寄主细胞的DNA聚合酶作用下，可合 成另一条DNA互补链，这样便形成了新的双DNA分子。 逆转录酶是一种多功能酶，它除了具有以RNA为模板的DNA聚合酶和以DNA为模板 的DNA聚合酶活性外还兼有RNaseH、DNA内切、DNA拓扑异构酵、DNA解链酶和tRNA 结合的活性。逆转录酶的发现，表明遗传信息也可以从RNA传递到DNA,从而丰富了分子 遗传学中心法则的内容。 几乎所有的真核生物的mRNA分子的3'末端都有一段多聚腺苷酸。当加入寡聚dT作 引物时，mRNA就可以成为逆转录酶的模板，在体外合成与其互补的DNA,称为cDNA 这种方法已成为生物技术和分子生物学研究中最常见的方法之一，也使逆转录酶得到广泛 的应用。 五、基因突变和DNA的损伤修复 1.基因突变 是指DNA的碱基顺序发生突然而永久性地变化，从而影响DNA的复制，并使DNA的 转录和翻译也跟着改变，因而表现出异常的遗传特征。DNA的突变可以有几种形式：() 279279 4．切除引物，填补缺口，连接修复 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其3′—OH端与前面一条老片段的5′端接近 时，即发生下列变化：在DNA聚合酶I的作用下，在引物RNA与DNA片段的连接处切断； 切去RNA引物后留下的空隙，由DNA聚合酶I催化合成一段DNA填补上；在DNA连接酶的 作用下，连接相邻的DNA链；修复掺入DNA链的错配碱基。这样以两条亲代DNA链为模 板，各自形成一条新的DNA互补链，结果是形成了两个DNA双股螺旋分子。每个分子中一 条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，故称为半保留复制。 四、逆转录 以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA，这与通常转录过程中遗传信息流 从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录(reverse transcription)。在20世纪六十年代Temin 根据有关的实验结果提出，由RNA肿瘤病毒逆向转录为DNA前病毒，然后由DNA前病毒 再转录为RNA肿瘤病毒的设想，但当时未得到重视。直至1970年，Temin和Baltimore各自 在鸟类劳氏肉瘤病毒和小鼠白血病病毒等RNA肿瘤病毒中找到了逆转录酶，才证明了存在 逆向转录过程。现在人们已发现各种高等真核生物的RNA肿瘤病毒都有逆转录酶。鸟类的 劳氏肉瘤病毒的逆转录酶具有三种分子形式，分别为α、αβ和β2，其中αβ是主要形式。 α亚基分子量为63 kDa，β亚基分子量为94 kDa。α亚基是β亚基的水解产物。只有α亚 基具有酶活性。哺乳动物的RNA肿瘤病毒的逆转录酶一般为单亚基结构。如小鼠白血病病 毒中的逆转录酶是分子量为70 kDa的单条多肽链。逆转录酶需要以RNA(或DNA)为模板， 以四种dNTP为原料，要求短链RNA(或DNA)作为引物，此外还需要适当浓度的二价阳离子 Mg2+和Mn2+，沿5′→3′方向合成DNA，形成RNA-DNA杂交分子(或DNA双链分子)。以 后，再以RNA-DNA杂交分子中的DNA链为模板，在寄主细胞的DNA聚合酶作用下，可合 成另一条DNA互补链，这样便形成了新的双链DNA分子。 逆转录酶是一种多功能酶，它除了具有以RNA为模板的DNA聚合酶和以DNA为模板 的DNA聚合酶活性外还兼有RNaseH、DNA内切酶、DNA拓扑异构酶、DNA解链酶和tRNA 结合的活性。逆转录酶的发现，表明遗传信息也可以从RNA传递到DNA，从而丰富了分子 遗传学中心法则的内容。 几乎所有的真核生物的mRNA分子的3′末端都有一段多聚腺苷酸。当加入寡聚dT作 引物时，mRNA就可以成为逆转录酶的模板，在体外合成与其互补的DNA，称为cDNA。 这种方法已成为生物技术和分子生物学研究中最常见的方法之一，也使逆转录酶得到广泛 的应用。 五、基因突变和DNA的损伤修复 1． 基因突变 是指DNA的碱基顺序发生突然而永久性地变化，从而影响DNA的复制，并使DNA的 转录和翻译也跟着改变，因而表现出异常的遗传特征。DNA的突变可以有几种形式：(1)