酶( internal yeast invertase),含有少量的糖。两种酶的蛋白质部分均为双亚基,二聚体, 两种形式的酶的氨基酸组成不同,外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸,Ser和Met,它 们的分子量也不同,外酶约为27万域或22万,与酵母的来源有关),内酶约为135万。 尽管这两种酶在组成上有较大的差别,但其底物专一性和动力学性质仍十分相似,因此, 本实验未区分内酶与外酶,而且由于内酶含量很少,极难提取,本实验提取纯化的主要 是外酶 两种酶的性质对照表如下 名称 糖含 量 亚为蔗为棉等电最适稳定最适 糖的子糖点 温度 的K 范围 外27万50%双|26mM150 50|4.93.53.0 60℃ 酶(22万) mM ~5.5)75 内13.5|<3%双25mM|150 酶万 mM ~5.5)90 实验中,用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度,在给定 的实验条件下,每分钟水解底物的量定为蔗糖酶的活力单位。比活力为每毫克蛋白质的 活力单位数。 本实验共有九个分实验: 蔗糖酶的提取与部分纯化 、离子交换柱层析纯化蔗糖酶 三、蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定 四、反应时间对产物形成的影响 五、pH对酶活性的影响和最适pH的测定 六、温度对酶活性的影响和反应活化能的测定 七、底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数K和最大反应速度V的测定 八、尿素(脲)抑制蔗糖酶的实验 九、棉子糖和果糖抑制蔗糖酶的实验 (一)蔗糖酶的提取与部分纯化 实验目的: 学习酶的纯化方法,并为动力学实验提供一定量的蔗糖酶。 二、试剂 1.啤酒酵母 2.二氧化硅223 酶（internal yeast invertase），含有少量的糖。两种酶的蛋白质部分均为双亚基，二聚体， 两种形式的酶的氨基酸组成不同，外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸，Ser 和 Met，它 们的分子量也不同，外酶约为 27 万(或 22 万，与酵母的来源有关)，内酶约为 13.5 万。 尽管这两种酶在组成上有较大的差别，但其底物专一性和动力学性质仍十分相似，因此， 本实验未区分内酶与外酶，而且由于内酶含量很少，极难提取，本实验提取纯化的主要 是外酶。 两种酶的性质对照表如下： 名 称 MW 糖 含 量 亚基 底 物 为 蔗 糖 的 Km 底 物 为 棉 子 糖 的 Km 等 电 点 pI 最适 pH 稳定 pH 范围 最适 温度 外 酶 27 万 (22 万) 50% 双 26mM 150 mM 5.0 4.9(3.5 ～5.5) 3.0 ～ 7.5 60℃ 内 酶 13.5 万 ＜3% 双 25mM 150 mM 4.5(3.5 ～5.5) 6.0 ～ 9.0 实验中，用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度，在给定 的实验条件下，每分钟水解底物的量定为蔗糖酶的活力单位。比活力为每毫克蛋白质的 活力单位数。 本实验共有九个分实验： 一、蔗糖酶的提取与部分纯化 二、离子交换柱层析纯化蔗糖酶 三、蔗糖酶各级分活性及蛋白质含量的测定 四、反应时间对产物形成的影响 五、pH 对酶活性的影响和最适 pH 的测定 六、温度对酶活性的影响和反应活化能的测定 七、底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数 Km和最大反应速度 Vmax 的测定 八、尿素（脲）抑制蔗糖酶的实验 九、棉子糖和果糖抑制蔗糖酶的实验 （一） 蔗糖酶的提取与部分纯化 一、实验目的： 学习酶的纯化方法，并为动力学实验提供一定量的蔗糖酶。 二、试剂： 1. 啤酒酵母 2. 二氧化硅