3.甲苯(使用前预冷到0℃以下) 4.去离子水(使用前冷至4℃左右) 5.冰块、食盐 6.1N乙酸 7.95%乙醇 、仪器: 研钵1个 2.离心管3个 3.滴管3个 4.量筒50ml1个 5.水浴锅1个 6.恒温水浴 7.烧杯100m12个 8.广泛pH试纸 9.高速冷冻离心机 四、操作步骤: 1.提取 (1)准备一个冰浴,将研钵稳妥放入冰浴中。 (2)称取5g干啤酒酵母和20g湿啤酒酵母,称20mg蜗牛酶及适量(约10g)二氧 化硅,放入研钵中。二氧化硅要予先研细 (3)量取预冷的甲苯3om缓慢加入酵母中,边加边研磨成糊状,约需60分钟。研 磨时用显微镜检査硏磨的效果,至酵母细胞大部分硏碎。 (4)缓慢加入预冷的40ml去离子水,每次加2m左右,边加边研磨,至少用30分 钟。以便将蔗糖酶充分转入水相。 (5)将混合物转入两个离心管中,平衡后,用高速冷离心机离心,4℃,10000pm, omin。如果中间白色的脂肪层厚,说明研磨效果良好。用滴管吸出上层有机相。 (6)用滴管小心地取出脂肪层下面的水相,转入另一个清洁的离心管中,4℃, 1000pm,离心10min (7)将清液转入量筒,量出体积,留出1.5ml测定酶活力及蛋白含量。剩余部分转 入清洁离心管中 (8)用广泛pH试纸检查清液pH,用N乙酸将pH调至50,称为“粗级分I 2.热处理 (1)予先将恒温水浴调到50℃,将盛有粗级分I的离心管稳妥地放入水浴中,50℃ 下保温30分钟,在保温过程中不断轻摇离心管。 (2)取出离心管,于冰浴中迅速冷却,用4℃,1000m,离心10min (3)将上清液转入量筒,量出体积,留出1.5ml测定酶活力及蛋白质含量(称为“热 级分II 3.乙醇沉淀 将热级分Ⅱ转入小烧杯中,放入冰盐浴(没有水的碎冰撒入少量食盐),逐滴加入224 3. 甲苯（使用前预冷到 0℃以下） 4. 去离子水（使用前冷至 4℃左右） 5. 冰块、食盐 6. 1N 乙酸 7. 95%乙醇 三、仪器： 1. 研钵 1 个 2. 离心管 3 个 3. 滴管 3 个 4. 量筒 50ml 1 个 5. 水浴锅 1 个 6. 恒温水浴 7. 烧杯 100ml 2 个 8. 广泛 pH 试纸 9. 高速冷冻离心机 四、操作步骤： 1. 提取 （1）准备一个冰浴，将研钵稳妥放入冰浴中。 （2）称取 5g 干啤酒酵母和 20g 湿啤酒酵母，称 20mg 蜗牛酶及适量（约 10g）二氧 化硅，放入研钵中。二氧化硅要予先研细。 （3）量取预冷的甲苯 30ml 缓慢加入酵母中，边加边研磨成糊状，约需 60 分钟。研 磨时用显微镜检查研磨的效果，至酵母细胞大部分研碎。 （4）缓慢加入预冷的 40ml 去离子水，每次加 2ml 左右，边加边研磨，至少用 30 分 钟。以便将蔗糖酶充分转入水相。 （5）将混合物转入两个离心管中，平衡后，用高速冷离心机离心，4℃，10000rpm， 10min。如果中间白色的脂肪层厚，说明研磨效果良好。用滴管吸出上层有机相。 （6）用滴管小心地取出脂肪层下面的水相，转入另一个清洁的离心管中，4℃， 10000rpm，离心 10min。 （7）将清液转入量筒，量出体积，留出 1.5ml 测定酶活力及蛋白含量。剩余部分转 入清洁离心管中。 （8）用广泛 pH 试纸检查清液 pH，用 1N 乙酸将 pH 调至 5.0，称为“粗级分 I”。 2. 热处理 （1）予先将恒温水浴调到 50℃，将盛有粗级分 I 的离心管稳妥地放入水浴中，50℃ 下保温 30 分钟，在保温过程中不断轻摇离心管。 （2）取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用 4℃，10000rpm，离心 10min。 （3）将上清液转入量筒，量出体积，留出 1.5ml 测定酶活力及蛋白质含量（称为“热 级分 II”）。 3. 乙醇沉淀 将热级分 II 转入小烧杯中，放入冰盐浴（没有水的碎冰撒入少量食盐），逐滴加入