c.含有可修饰的化学基团,偶联上配基后载体的结构不受破坏, d.可修饰的化学基团含量丰富,偶联后具有高吸附容量。 e.在偶联和洗脱的各种条件下,机械和化学性质稳定。 f.具有疏松的孔和亲水的网络结构,可使大分子自由通过,最好是球形、大小均匀、刚性的。 珠粒状的琼脂糖凝胶( Sepharose)是在亲和层析中应用最广的载体。交联琼脂糖凝胶 ( Sepharose CL4B)较其母体有更佳的理化稳定性,若在使用时需要更为激烈的条件,可考虑 选用交联琼脂糖凝胶作为载体。但是,交联会导致供偶联配基的位点减少,吸附容量也会相应减 少 3.配基 配基选择是否合适是关系到亲和层析成败的决定因素。可以作为配基的物质很多,可为较小 的有机分子,也可为天然的生物活性分子。根据配基的性质,可将其分为两大类 a.特异配基( special ligand) 一般说来,酶和专一性抑制剂、抗原和抗体、激素和受体中的一方均为特异配基。以此类配 基构成的亲和层析介质的选择特异性最高,分离效果也最好。缺点是此类配基多系不稳定的生物 活性物质,在偶联时活性损失大,价格昂贵,成本高。 b.通用配基( general lig 以此类配基制备的亲和层析介质可用于一类物质的分离。如用NADH作配基可以吸附脱氢 酶类,用ATP作配基可以吸附激酶类,用外源凝集素作配基可以吸附糖蛋白类。用通用配基制 成的亲和层析介质的选择性低于用特异配基制成的亲和层析介质,但前者的应用范围较广,其中 不少已有商品供应,故应用方便,价格也略较后者便宜。 理想的配基在溶液中与酶结合后的解离常数应为103~10-4mol。当解离常数大于10 mol几L时亲和性太低,不能有效地吸附酶,如酶与某些弱抑制剂之间的亲和性即属此情况。反之 当解离常数低于103mol几L时亲和性太强,导致洗脱十分困难,如激素与受体间的亲和性即属这 种情况。另外,配基的结构中应有多个功能基团,以保证在与载体偶联后不影响它和酶特异性结 合的部位。 4.手臂 用小分子配基直接偶联到载体上制备亲和层析介质时,尽管配基和酶之间的亲和力在适当的10 c. 含有可修饰的化学基团，偶联上配基后载体的结构不受破坏。 d. 可修饰的化学基团含量丰富，偶联后具有高吸附容量。 e. 在偶联和洗脱的各种条件下，机械和化学性质稳定。 f. 具有疏松的孔和亲水的网络结构，可使大分子自由通过，最好是球形、大小均匀、刚性的。 珠粒状的琼脂糖凝胶（Sepharose）是在亲和层析中应用最广的载体。交联琼脂糖凝胶 （Sepharose CL-4B）较其母体有更佳的理化稳定性，若在使用时需要更为激烈的条件，可考虑 选用交联琼脂糖凝胶作为载体。但是，交联会导致供偶联配基的位点减少，吸附容量也会相应减 少。 3．配基 配基选择是否合适是关系到亲和层析成败的决定因素。可以作为配基的物质很多，可为较小 的有机分子，也可为天然的生物活性分子。根据配基的性质，可将其分为两大类： a. 特异配基（special ligand） 一般说来，酶和专一性抑制剂、抗原和抗体、激素和受体中的一方均为特异配基。以此类配 基构成的亲和层析介质的选择特异性最高，分离效果也最好。缺点是此类配基多系不稳定的生物 活性物质，在偶联时活性损失大，价格昂贵，成本高。 b. 通用配基（general ligand） 以此类配基制备的亲和层析介质可用于一类物质的分离。如用 NADH 作配基可以吸附脱氢 酶类，用 ATP 作配基可以吸附激酶类，用外源凝集素作配基可以吸附糖蛋白类。用通用配基制 成的亲和层析介质的选择性低于用特异配基制成的亲和层析介质，但前者的应用范围较广，其中 不少已有商品供应，故应用方便，价格也略较后者便宜。 理想的配基在溶液中与酶结合后的解离常数应为 10 -8 ～10 -4 mol /L。当解离常数大于 10 -4 mol /L 时亲和性太低，不能有效地吸附酶，如酶与某些弱抑制剂之间的亲和性即属此情况。反之， 当解离常数低于 10 -8 mol /L 时亲和性太强，导致洗脱十分困难，如激素与受体间的亲和性即属这 种情况。另外，配基的结构中应有多个功能基团，以保证在与载体偶联后不影响它和酶特异性结 合的部位。 4．手臂 用小分子配基直接偶联到载体上制备亲和层析介质时，尽管配基和酶之间的亲和力在适当的