七、蛋白质的分离和纯化 1、沉淀,见六、2 2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正 极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。 3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法 4、层析 a离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定PH时,各蛋白质的电荷 量及性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析,负曳曩小的 ⑤添校过分质进人质面后大分子蛋白不 时入孔内而径直流出 5、超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋 白质其密度与形态各不相同而分开。 八、多肽链中氨基酸序列分析 a分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成 (蛋白质水解为个别氨基酸,测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成) 测定肽链头、尾的氨基酸残基 二硝基氟苯法(DNP法) 头 尾端羧肽酶A、B、C法等 丹酰氯法 水解肽链,分别分析 胰凝乳蛋自酶(糜蛋白酶)法:水解茇香族氪基酸的羧基侧肽键 胰蛋自法:水解氮酸糙氮畯的羧基侧肽键 溴化法:水解蛋氨酸羧基侧的肽键 Edman降解法测定各肽段的氨基酸顺序 (氨基末端氨基酸的游离α-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物,用层析法鉴定 氨基酸种类) b通过核酸推演氨基酸序列。 第二章核酸的结构与功能 、核酸的分子组成:基本组成单位是核苷酸,而核苷酸则由碱基、戊糖和磷酸三种 成分连接而成。 两类核酸:脱氧核糖核酸(DNA),存在于细胞核和线粒体内 核糖核酸(RNA),存在于细胞质和细胞核内 1、碱基: NH2 胞嘧啶胸腺嘧啶尿嘧啶 鸟嘌呤 腺嘌呤 唸和魔啶环均貪有共轭双毽,因此对波长260左右的紫外光有较强吸收,这 重要的理化性质被用于对核酸、核苷酸、核苷及碱基进行定性定量分析3 七、蛋白质的分离和纯化 １、沉淀，见六、２ ２、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正 极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。 ３、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 ４、层析： a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定ＰＨ时，各蛋白质的电荷 量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋 白质首先被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能 时入孔内而径直流出。 ５、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋 白质其密度与形态各不相同而分开。 八、多肽链中氨基酸序列分析 a.分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成 （蛋白质水解为个别氨基酸，测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成） ↓ 测定肽链头、尾的氨基酸残基 二硝基氟苯法（DNP 法） 头端 尾端 羧肽酶Ａ、Ｂ、Ｃ法等 丹酰氯法 ↓ 水解肽链，分别分析 胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的羧基侧肽键 胰蛋白酶法：水解赖氨酸、精氨酸的羧基侧肽键 溴化脯法：水解蛋氨酸羧基侧的肽键 ↓ Edman 降解法测定各肽段的氨基酸顺序 （氨基末端氨基酸的游离α-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物，用层析法鉴定 氨基酸种类） b.通过核酸推演氨基酸序列。 第二章 核酸的结构与功能 一、核酸的分子组成：基本组成单位是核苷酸，而核苷酸则由碱基、戊糖和磷酸三种 成分连接而成。 两类核酸：脱氧核糖核酸（DNA），存在于细胞核和线粒体内。 核糖核酸（RNA），存在于细胞质和细胞核内。 １、碱基： NH2 NH2 O CH3 O O O O O NH2 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 鸟嘌呤 腺嘌呤 嘌呤和嘧啶环中均含有共轭双键，因此对波长 260nm 左右的紫外光有较强吸收，这 一重要的理化性质被用于对核酸、核苷酸、核苷及碱基进行定性定量分析