度(mg蛋白/m)为横座标,画出反应速度与酶浓度的关系曲线 表1级分I、Ⅱ、Ⅲ的酶活力测定 各管名称 对照粗级分1 热级分Ⅱ 醇级分Ⅲ葡萄糖 管数→ 101 酶液(m) 000050200500050200500050200.507 060550400.10050200100550400.101008 乙酸缓冲液 0.20.20.20.2020.20.20.20.20.2/ 蔗糖0.2moL 0.20.20.20.2020.20.20.2020.2/ 加入蔗糖,立即摇匀开始计时,室温准确反应10min后,立即加碱性铜 试剂中止反应。 碱性铜试剂 01.01.01.01.01.01.01.01.01.0 用保鲜膜封口,扎眼,沸水浴加热8mm,立即用自来水冷却。 磷钼酸试剂 1.01.01.01.01010101.01.01.01.01.0 5.0505.0505.05.05.05.0505.0505.0 E=μ mol/min. I 平均E u mol/min·ml Units/m原始组 稀释后酶液的活力(按还原糖计算): A650×0.2×2 H moles E A650×10×Bmin×ml 式中:A650—第2~10管所测A650 A‘650——第12管所测A650 第12管葡萄糖取样量 ——标准葡萄糖浓度2mmol/L=2μmol/ml 10—反应10min B——每管加入酶液ml数 原始酶液的酶活力E=(平均E'/2)×稀释倍数( Units/ml原始组分) 八、计算各级分的比活力,纯化倍数及回收率,并将数据列于下表: 为了测定和计算下面纯化表中的各项数据,对各个级分都必须取样,每取一次样 对于下一级分来说会损失一部分量,因而要对下一个级分的体积进行校正,以使回收率 的计算不致受到不利的影响229 度（mg 蛋白/ml）为横座标，画出反应速度与酶浓度的关系曲线。 表 1 级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的酶活力测定 各管名称→ 对照 粗级分Ⅰ 热级分Ⅱ 醇级分Ⅲ 葡萄糖 管数→ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 酶液(ml) 0.0 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 / / H2O(ml) 0.6 0.55 0.40 0.10 0.05 0.20 0.10 0.55 0.40 0.10 1.0 0.8 乙酸缓冲液 (0.2mol/L pH4.9) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / 葡萄糖 2mmol/L / / / / / / / / / / / 0.2 蔗糖 0.2mol/L 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / 加入蔗糖，立即摇匀开始计时，室温准确反应 10min 后，立即加碱性铜 试剂中止反应。 碱性铜试剂 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 用保鲜膜封口，扎眼，沸水浴加热 8min，立即用自来水冷却。 磷钼酸试剂 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 H2O 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 A650nm E’=μmol/min·ml 平均 E’ μmol/min·ml Units/ml 原 始 组 分 稀释后酶液的活力(按还原糖计算)： 式中： A650 ──第 2~10 管所测 A650 A’650──第 12 管所测 A650 0.2 ── 第 12 管葡萄糖取样量 2 ── 标准葡萄糖浓度 2mmol/L = 2μmol/ml 10 ──反应 10min B ──每管加入酶液 ml 数 原始酶液的酶活力 E = (平均 E’/2)×稀释倍数（Units / ml 原始组分） 八、计算各级分的比活力，纯化倍数及回收率，并将数据列于下表： 为了测定和计算下面纯化表中的各项数据，对各个级分都必须取样，每取一次样， 对于下一级分来说会损失一部分量，因而要对下一个级分的体积进行校正，以使回收率 的计算不致受到不利的影响。 ） μ（ ml moles A B A E      = ' 10 min 0.2 2 ' 650 650