4.塑料可见比色杯(杯上和器皿染色后可用少量95%的乙醇荡洗) 5.水浴锅 6.电炉 7.保鲜膜 8.橡皮筋 五、各级分蛋白质含量的测定 采用考马斯亮兰染料法( Bradford法)的微量法测定蛋白质含量,参见实验-“蛋 白质含量的测定法”(因Tris会干扰 Lowry法的测定)。标准蛋白的取样量为0.1、02 03、04、0.5、06、0.8、1.0ml,用去离子水补足到1.0ml 各级分先要仔细寻找和试测出合适的稀释倍数,并详细记录稀释倍数的计算(使用移液 管和量筒稀释)。下列稀释倍数仅供参考: 粗级分I:10~50倍 热级分:10~50倍 醇级分Ⅲ10~50倍 柱级分IV:不稀释 确定了稀释倍数后,每个级分取3个不同体积的样进行测定,然后取平均值,计算 出各级分蛋白质浓度 六、级分I、II、III蔗糖酶活性测定 用002 mol/L pH49乙酸缓冲液(也可以用pH~6的去离子水代替)稀释各级分酶 液,试测出测酶活合适的稀释倍数 I:1000~10000倍 Il:1000~10000倍 1000~10000倍 以上稀释倍数仅供参考。 按“表1”的顺序在试管中加入各试剂,进行测定,为简化操作可取消保鲜膜封口 沸水浴加热改为用90~95℃水浴加热8~10min 七、柱级分ⅣV酶活力的测定 1.酶活力的测定参照“表1”设计一个表格,反应混合物仍为lmls 2.第1管仍为蔗糖对照,9、10管为葡萄糖的空白与标准,与“表1”中的1l、12 管相同。 3.2~7管加入柱级分IV(取样前先试测出合适的稀释倍数),分别为002ml、005ml 0.1ml、0.2ml、04ml和06ml,然后各加0.2m乙酸缓冲液(02mol/LpH4.9),每管用 去离子水补充到08ml 4.1-~7管各加入02ml02molL的蔗糖,每管由加入蔗糖开始计时,室温下准确反应 l0min,立即加入lml碱性铜试剂中止反应,然后按“表1”中的步骤进行测定 5.第8管为0时间对照,与第7管相同,只是在加入2ml蔗糖之前,先加入碱性铜 试剂,防止酶解作用。此管只用于观察,不进行计算 6.计算柱级分IV的酶活力: Units/ml原始溶液。 7.以每分钟生成的还原糖的μ umoles数为纵座标,以试管中lml反应混合物中的酶浓228 4. 塑料可见比色杯（杯上和器皿染色后可用少量 95% 的乙醇荡洗） 5. 水浴锅 6. 电炉 7. 保鲜膜 8. 橡皮筋 五、各级分蛋白质含量的测定 采用考马斯亮兰染料法（Bradford 法）的微量法测定蛋白质含量，参见 实验－“蛋 白质含量的测定法”（因 Tris 会干扰 Lowry 法的测定）。标准蛋白的取样量为 0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0ml，用去离子水补足到 1.0ml。 各级分先要仔细寻找和试测出合适的稀释倍数，并详细记录稀释倍数的计算（使用移液 管和量筒稀释）。下列稀释倍数仅供参考： 粗级分 I： 10～50 倍 热级分 II： 10～50 倍 醇级分 III： 10～50 倍 柱级分 IV： 不稀释 确定了稀释倍数后，每个级分取 3 个不同体积的样进行测定，然后取平均值，计算 出各级分蛋白质浓度。 六、级分 I、II、III 蔗糖酶活性测定 用 0.02mol/L pH4.9 乙酸缓冲液（也可以用 pH5～6 的去离子水代替）稀释各级分酶 液，试测出测酶活合适的稀释倍数： I ： 1000～10000 倍 II ： 1000～10000 倍 III ： 1000～10000 倍 以上稀释倍数仅供参考。 按“表 1”的顺序在试管中加入各试剂，进行测定，为简化操作可取消保鲜膜封口， 沸水浴加热改为用 90～95℃水浴加热 8～10min。 七、柱级分 IV 酶活力的测定 1. 酶活力的测定参照“表 1”设计一个表格，反应混合物仍为 1ml。 2. 第 1 管仍为蔗糖对照，9、10 管为葡萄糖的空白与标准，与“表 1”中的 11、12 管相同。 3. 2～7 管加入柱级分 IV（取样前先试测出合适的稀释倍数），分别为 0.02 ml、0.05 ml、 0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml 和 0.6ml，然后各加 0.2ml 乙酸缓冲液（0.2mol/L pH4.9），每管用 去离子水补充到 0.8ml。 4. 1~7 管各加入 0.2 ml 0.2mol/L 的蔗糖，每管由加入蔗糖开始计时，室温下准确反应 10min，立即加入 1ml 碱性铜试剂中止反应，然后按“表 1”中的步骤进行测定。 5. 第 8 管为 0 时间对照，与第 7 管相同，只是在加入 0.2ml 蔗糖之前，先加入碱性铜 试剂，防止酶解作用。此管只用于观察，不进行计算。 6. 计算柱级分 IV 的酶活力： Units / ml 原始溶液。 7. 以每分钟生成的还原糖的moles 数为纵座标，以试管中 1ml 反应混合物中的酶浓