昆虫中肠酯酶活性的测定 实验目的: 了解中肠酯酶的作用,掌握中肠酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 供试物质与供试昆虫β谷甾醇含量95%瑞香亭,含量95%;狼 毒色原酮,含量95%‰。 三、实验方法 处理昆虫时用β-谷甾醇等3种化合物(200μgmL)和 印楝素(80μ吕mL)处理叶碟后连续饲喂菜粉蝶5龄幼虫,72 h后取样。每处理取中肠10条放入玻璃匀浆器中加1mL 磷酸盐缓冲液(004μmo1mL,pH=7),在冰浴中匀浆将 匀浆液倒入离心管中离心(2100G,15min)后取上清液用缓 冲液稀释10倍作为酶液。用“ FoLin-酚”法测定酶液 母液中蛋白质含量,即1mL酶液母液+5 mAolin-甲 液+05 mlfoi in-乙液+1mL双蒸水,然后在30℃下反 应30min后,求出OD500值,从标准曲线上求出1mL酶液 中蛋白质的量(mg,最后换算成mg蛋白质/min水解a 醋酸萘酯的μmoⅠ数作为酶活力指标。在具塞试管内加入 5mL底物溶液(3×10-4μ mo mla-醋酸萘酯)置于 25℃下平衡25min,加入酶液1mL,置25℃下温育30mi n,立即加入1mL显色剂(1%固定兰盐B溶液和25%十二烷 基硫酸钠溶液2:5混合)摇匀,中止反应并显色,30min后测昆虫中肠酯酶活性的测定 一、实验目的： 了解中肠酯酶的作用，掌握中肠酯酶活性的测定方法。 二、实验材料 供试物质与供试昆虫β 谷甾醇,含量 95%;瑞香亭,含量 95%;狼 毒色原酮,含量 95%。 三、实验方法 处理昆虫时,用β-谷甾醇等 3 种化合物(200μｇ ｍＬ)和 印楝素(80μｇ ｍＬ)处理叶碟后连续饲喂菜粉蝶5龄幼虫,72 ｈ后取样。每处理取中肠 10 条,放入玻璃匀浆器中,加 1ｍＬ 磷酸盐缓冲液(0 04μｍｏｌ ｍＬ,ｐＨ=7),在冰浴中匀浆,将 匀浆液倒入离心管中离心(2100Ｇ,15ｍｉｎ)后取上清液用缓 冲液稀释 10 倍作为酶液。用“Ｆｏｌｉｎ-酚”法测定酶液 母液中蛋白质含量,即 1ｍＬ酶液母液+5ｍＬＦｏｌｉｎ-甲 液+0 5ｍＬＦｏｌｉｎ-乙液+1ｍＬ双蒸水,然后在 30℃下反 应 30ｍｉｎ后,求出ＯＤ500 值,从标准曲线上求出 1ｍＬ酶液 中蛋白质的量(ｍｇ),最后换算成ｍｇ蛋白质/ｍｉｎ水解α- 醋酸萘酯的μｍｏｌ数作为酶活力指标。在具塞试管内加入 5ｍＬ底物溶液(3×10-4μｍｏｌ ｍＬα-醋酸萘酯)置于 25℃下平衡 25ｍｉｎ, 加入酶液 1ｍＬ,置 25℃下温育 30ｍｉ ｎ,立即加入 1ｍＬ显色剂(1%固定兰盐Ｂ溶液和 25%十二烷 基硫酸钠溶液 2∶5 混合)摇匀,中止反应并显色,30ｍｉｎ后测