实验六EA玫瑰花环试验 B淋巴细胞上有免疫球蛋白的下©受体，以鸡红细胞作为指示细胞与相应的抗红细胞抗 体形成EA,B淋巴细胞可以通过FC受体与EA结合，形成EA玫瑰花环，在显微镜下可以观 察到吸附有红细胞的B淋巴细胞，以此计算B淋巴细胞的数目。下C受体并非B细胞所特有， 中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞表面均有这种受体，但这些细胞可以通过形态学加以区别。 此方法简单，目前较常采用，以检测B淋巴细胞的百分率。 [目的要求] 1.学握E玫瑰花环试验的原理及操作方法。 2.熟悉淋巴细胞的分离方法。 [材料与试剂] 1.试管，滴管，吸管，注射器，载玻片，盖玻片，血球计数板，鸡，家兔等。 2.淋巴细胞分层液，无钙、镁的Hak's液，肝素液，姬姆萨染色液，1%戊二醛溶液， 95%乙醇，2%盐酸溶液等。 3.鸡红细胞志液的制备：由于绵羊红细胞易于与T淋巴细胞形成-玫瑰花环，造成混 淆，所以一般在检测B淋巴细胞时，采用鸡红细胞。从鸡翅下静脉采血，用肝素抗凝，以 Hank's液洗涤3次，最后配成4%的细胞悬液。 4.抗鸡红细胞抗体的制备（溶血素）：参见实验十，溶血素凝集价为1：2000。 [操作方法] 1.分离淋巴细胞，制成2.5X10个/m1细胞液。 2.EA悬液的制备：取4%鸡红细胞悬液2m1加入试管中，再加等量的1：4000稀释的 溶血素，混匀，37℃水浴15min,取出后离心，以Hank's液洗2次，再以2 ml Hank's液悬 浮，即为%的EA悬液。 3.取淋巴细胞悬液0.2ml于试管中，加入等量的4%的EA悬液，混匀，室温作用30min, 1000r/min离心5nin,吸弃过多的上消液，置4℃2-4h。 4.取出后，将沉淀轻轻摇起，加1%戊二醛溶液0.1ml,混匀后置4℃固定30min。 5.以悬液制片，自然干燥，滴加姬姆萨染色液染色2min,加自来水继续放置15min, 冲洗，将玻片置95%酒精缸腿色15-30S(以脱成浅紫蓝色为度)，再置盐酸液缸（按1%HC1 16