沉淀的淋巴细胞用Hank's液配成细胞数为5×10个/ml的悬液 2.方法2 取豚鼠肝素抗凝血2ml,加等量Hank's液混合，沿离心管壁用毛细管缓缓加于2ml 淋巴细胞分层液表面，置水平转子离心机，2000r/min离心20min,用毛细管吸取血浆与分 层液之间的乳白色淋巴细胞层，以Hank's液如上洗涤，再以Hank's液配成细胞数为5×10 个/ml的悬液。 3.方法3 取豚鼠肝素抗凝血2ml,置37℃水浴中静置30-40min,吸取上层白细胞与血浆的混合 液（约1ml):于混合液中加Hank's液数毫升，1500r/min离心5-10min,弃上清，重复用 Hak's液洗涤4次，沉淀均匀即为淋巴细胞悬液。 (仁)家兔红细胞(RRBC)的制备 .心脏采集家兔肝素抗凝血5ml，以2000r/min离心10min,弃上清液。 2.用Hank's液反复洗涤红细胞三次，每次2000r/min离心10min,再以Hank's液配 成1O%RRBC悬液。 (三)E-花环形成细胞 1.取0.1ml淋巴细胞悬液，加10%RRBC悬液0.1ml,再加小牛血清0.1ml。 2.37℃水浴15min,600r/min离心5min,吸弃上清液，4℃作用2-4h。 3.将细胞沉淀轻径摇起，加0.8%戊二醛溶液0.1ml，混匀后4℃固定15min。 4.将洁净的载玻片用Hak's液沾湿，滴一小滴细胞悬液，让其自然散开即可 5.自然干燥后，滴加甲醇固定5min,用Giemsa--Weight染色液染色，水洗，干燥镜检。 6.结果判断：凡吸附3个以上RBC的淋巴细胞判为一个E-花环形成细胞。每一标本 检查200个淋巴细胞，按下列公式计算E-玫瑰花环形成率。 E-玫现花环形成细胞数 E-玫瑰花环形成率= ×100% 计数的淋巴细胞总数 [思考题] 1.E-玫瑰花环试验的操作方法。 2.为什么可以用E花环试验检测T细胞的数量？ 15