水产学报 mL。随后 Paulsen等又报道了大西洋鲑腹腔注射 quinqueradiata和虹鳟中能增强吞噬细胞活性,提高鱼体对 LPS和酵母β·葡聚糖后,能增强血液、头肾、肠白细胞中格氏乳球菌( Enterococcus seriola和弧菌的抵抗力/B/。 溶菌酶的活力,而在脾脏和肾中的溶菌酶活力没有改变 菌体组分中,具有免疫增强作用的还有细菌DNA 值得一提的是,Prk等还报道了来自杂色革盖菌0世纪80年代, Yamonato等国报道了来源于一种非致 ( Coriolus versicolo)的蛋白多糖(PK)能增强尼罗罗非鱼病性的结核杆菌样分支杆菌(BCG)的基因组DNA提取物 (orα chomis niloticus)对迟钝爱德华氏菌( Edwardsiella能活化小鼠天然杀伤细胞,并诱导产生干扰素,从而抑制 audn)的抵抗力 病毒复制和肿瘤生长。该发现揭示了DNA不仅是重要 壳多糖是一种多糖类物质,它是形成某些真菌细胞的遗传物质,而且还具有免疫调节作用。1991年,另一研 壁以及甲壳动物和昆虫外骨骼的主要组分,壳聚糖则是究也发现某些特定的细菌DNA能刺激小鼠B淋巴细胞 种脱乙酰基的壳多糖。在壳多糖和壳聚糖的免疫学功增殖和免疫球蛋白的分泌,而脊椎动物DNA却没有这种 能研究方面, Anderson等曾报道了溪鳟( sahelinus作用。这一现象引起了科学界的关注,之后大量的研 fontinalis)和虹鳟经壳聚糖溶液注射或浸泡后,血液中的一究证明,这种免疫调节作用与细菌基因组DNA的特殊结 些免疫指标如杀菌活力、髓过氧化物酶活性和lgM浓度构有关,在细菌基因组中,非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷 均显著增强,对杀蛙气单胞菌感染的抵抗力也明显增加;酸(φpG出现频率很高,平均每16对二核苷酸就出现 Esteban等31则发现金鲷饲喂壳多糖后,能增强天然溶血次,而在脊椎动物基因组中该结构的出现频率仅为细菌 补体和细胞毒活力,促进吞噬细胞呼吸爆发和杀菌作用,的1/4,并且胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸呈高度甲基化。因 但溶菌酶的活力没有改变;此外 Bullock等的研究也表此,人们把以未甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸为核心 明,虹鳟经腹腔注射壳多糖后,其血液补体活力、吞噬细的特殊核苷酸序列称为免疫刺激序列(S,动物免疫系 胞呼吸爆发和吞噬活力显著增强,而经静脉注射壳多糖统正是通过识别ISS的特征结枃来识别微生物DNA和自 后,所有的免疫指标却没有发生变化 身DNA,从而形成针对病原体的特异免疫防护机制1 葡聚糖也是一种重要的免疫增强剂,其中对酵母葡近年来的研究表明,含有IS序列的细菌、病毒和质粒 聚糖的研究最为广泛。 Robertson等曾报道了大西洋DNA也能增强鱼类的先天免疫应答,如 Johansen等l报 鲑、斑点叉尾鲴等腹腔注射或口服酿酒酵母道了质粒 PBLCAT2DNA能诱导大西洋鲑白细胞产生有 ( Saccharomyces cerevisia)细胞壁葡聚糖后,能增加对鳗弧抗病毒作用的细胞因子,而质粒经 DNase处理后,则无此 菌、杀鲑弧菌( Vibrio salmonicida、鲁氏耶尔森菌 Yersinia应答; Ounouna等报道了海豚链球菌( Streptococcus iniae nckm)和爱德华菌( Edwardsiella ictaluri)的抵抗力;Sung基因组DNA能增强斑点叉尾鲴NCC的活力,而基因组 等发现斑节对虾( Penaeus monodon)经酵母葡聚糖溶液DNA经 Dnase i处理后,该作用消失; Kannelos等13报道 10.5~1 mg .mL‘1)浸泡后能增加对创伤弧菌(vbo了鲫联合注射含有qpG基序的质粒DNA和蛋白亚单位 vulnifiCus的抵抗力。另有研究证实,酵母葡聚糖还具有免疫苗后,能增强鱼体抗体的应答能力;此外, Kanellos1 疫佐剂作用,大西洋鮭联合注射杀蛙气单胞菌疫苗和酵Km14和 Heppell等也有类似的报道 母葡聚糖后,与单独注射疫苗的对照组相比,其抗体应答 另外,核苷酸早就被认为是哺乳动物营养的重要组 水平和对疖病的抵抗力显著增强,而只注射酵母葡聚糖成部分,可增强小鼠对金黄色葡萄球菌( Staphlococcus 的实验组,免疫保护作用不明显1。此外,在对大西洋aes)和白色假丝酵母( Candida albicans的抵抗力。在鱼 鮭虹鳟、木叶鲽( Scophthalmus maximus))、斑点叉尾鲴和斑类中, burrells等l报道了大西洋鲑、银大麻哈鱼和虹鳟 节对虾等的硏究中还分别发现,酵母葡聚糖能増强溶菌饲喂添加有外源核苷酸的饲料后,能増强对细菌、病毒、 酶、补体和巨噬细胞的杀菌活力8。除了酵母葡聚糖立克次体感染的抵抗力。 Sakai等1也发现,饲料中添加 外,来自裂褶菌( Schizophyllan )的β-1,3葡聚糖酵母来源的核苷酸,能增强鲤的非特异性免疫反应 (vSD也有增强抗病的作用。Nk等曾报道银大麻哈鱼 微生物代谢和发酵产物研究表明,微生物的某些 注射或口服wST后能增强对杀蛙气单胞菌的抵抗力;代谢和发酵产物能作为鱼类免疫增强剂,如FK565(庚酮 Stolen等报道了斑点叉尾鲴饲喂wST后,其巨噬细胞yD谷氨酸L内消旋二氨基庚二基DC2丙氨酸)是与乳 超氧阴离子的产量增加,受爱德华菌胁迫时死亡率降低,酰四肽(FK156)相关的一种多肽,它是从橄榄灰链球菌 但其血清溶菌酶活力没有增加,VST对爱德华菌疫苗的 Streptomyces olivaceogniseus)的培养液中分离获得的。Ktao 佐剂作用也不明显; Sahoo等还用vsT饲喂印度野鲮和 Yoshida等{l证实,虹鳟和青甘注射FK565后能使吞 Labeo ohita),发现鱼体非特异性免疫和特异性免疫水平噬细胞活化,増强抗杀蛙气单胞菌的能力;在虹鳟中,用 均明显增强,对嗜水气单胞菌( aeromonas hydrophila)的抵鲁氏耶尔森菌或杀蛙气单胞菌O·抗原制剂和FK565联 抗力增加。此外还有研究表明,来自乳糖发酵短杆菌合免疫后,能提高脾抗体形成细胞的数量和体液中抗体 ( Brevibacterium lactofermentum)的肽聚糖在青甘( seriola的滴度。HF203是微生物利用鸡蛋的发酵产物, 201994-2008ChinaaCademicJoumalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhtp://www.enki.netmL - 1 。随后 Paulsen 等[20 ] 又报道了大西洋鲑腹腔注射 LPS 和酵母β- 葡聚糖后 ,能增强血液、头肾、肠白细胞中 溶菌酶的活力 ,而在脾脏和肾中的溶菌酶活力没有改变。 值得一提的是 , Park 等[21 ] 还报道了来自杂色革盖菌 ( Coriolus versicolor) 的蛋白多糖 ( PS2K) 能增强尼罗罗非鱼 ( Oreochromis niloticus) 对 迟 钝 爱 德 华 氏 菌 ( Edwardsiella tarda) 的抵抗力。 壳多糖是一种多糖类物质 ,它是形成某些真菌细胞 壁以及甲壳动物和昆虫外骨骼的主要组分 ,壳聚糖则是 一种脱乙酰基的壳多糖。在壳多糖和壳聚糖的免疫学功 能研 究 方 面 , Anderson 等[22 ] 曾 报 道 了 溪 鳟 ( Salvelinus fontinalis) 和虹鳟经壳聚糖溶液注射或浸泡后 ,血液中的一 些免疫指标如杀菌活力、髓过氧化物酶活性和 IgM 浓度 均显著增强 ,对杀蛙气单胞菌感染的抵抗力也明显增加; Esteban 等[23 ]则发现金鲷饲喂壳多糖后 ,能增强天然溶血 补体和细胞毒活力 ,促进吞噬细胞呼吸爆发和杀菌作用 , 但溶菌酶的活力没有改变;此外 Bullock 等[24 ]的研究也表 明 ,虹鳟经腹腔注射壳多糖后 ,其血液补体活力、吞噬细 胞呼吸爆发和吞噬活力显著增强 ,而经静脉注射壳多糖 后 ,所有的免疫指标却没有发生变化。 葡聚糖也是一种重要的免疫增强剂 ,其中对酵母葡 聚糖的研究最为广泛。Robertsen 等[25 ] 曾报道了大西洋 鲑、斑 点 叉 尾 等 腹 腔 注 射 或 口 服 酿 酒 酵 母 ( Saccharomyces cerevisiae) 细胞壁葡聚糖后 ,能增加对鳗弧 菌、杀鲑弧菌 ( Vibrio salmonicida) 、鲁氏耶尔森菌 ( Yersinia ruckeri) 和爱德华菌 ( Edwardsiella ictaluri) 的抵抗力; Sung 等[26 ]发现斑节对虾 ( Penaeus monodon) 经酵母葡聚糖溶液 (0. 5～1 mg·mL - 1 ) 浸泡后能增加对创伤弧菌 ( Vibrio vulnificus) 的抵抗力。另有研究证实 ,酵母葡聚糖还具有免 疫佐剂作用 ,大西洋鲑联合注射杀蛙气单胞菌疫苗和酵 母葡聚糖后 ,与单独注射疫苗的对照组相比 ,其抗体应答 水平和对疖病的抵抗力显著增强 ,而只注射酵母葡聚糖 的实验组 ,免疫保护作用不明显[27 ] 。此外 ,在对大西洋 鲑、虹鳟、木叶鲽( Scophthalmus maximus) 、斑点叉尾 和斑 节对虾等的研究中还分别发现 ,酵母葡聚糖能增强溶菌 酶、补体和巨噬细胞的杀菌活力[28 ,29 ] 。除了酵母葡聚糖 外 ,来自裂褶菌 ( Schizophyllum commune) 的β21 , 3 葡聚糖 (VST) 也有增强抗病的作用。Nikl 等曾报道银大麻哈鱼 注射或口服 VST 后能增强对杀蛙气单胞菌的抵抗力; Stolen 等[30 ]报道了斑点叉尾 饲喂 VST 后 ,其巨噬细胞 超氧阴离子的产量增加 ,受爱德华菌胁迫时死亡率降低 , 但其血清溶菌酶活力没有增加 , VST 对爱德华菌疫苗的 佐剂作用也不明显; Sahoo 等[31 ]还用 VST 饲喂印度野鲮 (Labeo rohita) ,发现鱼体非特异性免疫和特异性免疫水平 均明显增强 ,对嗜水气单胞菌 ( Aeromonas hydrophila) 的抵 抗力增加。此外还有研究表明 , 来自乳糖发酵短杆菌 ( Brevibacterium lactofermentum ) 的 肽 聚 糖 在 青 甘 ( Seriola quinqueradiata) 和虹鳟中能增强吞噬细胞活性 ,提高鱼体对 格氏乳球菌( Enterococcus seriola) 和弧菌的抵抗力[32 ] 。 在菌体组分中 ,具有免疫增强作用的还有细菌 DNA。 20 世纪 80 年代 , Yamonato 等[33 ]报道了来源于一种非致 病性的结核杆菌样分支杆菌(BCG) 的基因组 DNA 提取物 能活化小鼠天然杀伤细胞 ,并诱导产生干扰素 ,从而抑制 病毒复制和肿瘤生长。该发现揭示了 DNA 不仅是重要 的遗传物质 ,而且还具有免疫调节作用。1991 年 ,另一研 究也发现某些特定的细菌 DNA 能刺激小鼠 B 淋巴细胞 增殖和免疫球蛋白的分泌 ,而脊椎动物 DNA 却没有这种 作用[34 ] 。这一现象引起了科学界的关注 ,之后大量的研 究证明 ,这种免疫调节作用与细菌基因组 DNA 的特殊结 构有关 ,在细菌基因组中 ,非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷 酸(CpG) 出现频率很高 ,平均每 16 对二核苷酸就出现一 次 ,而在脊椎动物基因组中该结构的出现频率仅为细菌 的 1/ 4 ,并且胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸呈高度甲基化。因 此 ,人们把以未甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸为核心 的特殊核苷酸序列称为免疫刺激序列 (ISS) ,动物免疫系 统正是通过识别 ISS 的特征结构来识别微生物 DNA 和自 身 DNA ,从而形成针对病原体的特异免疫防护机制[35 ] 。 近年来的研究表明 , 含有 ISS 序列的细菌、病毒和质粒 DNA 也能增强鱼类的先天免疫应答 ,如 J ohansen 等[36 ]报 道了质粒 pBLCAT2 DNA 能诱导大西洋鲑白细胞产生有 抗病毒作用的细胞因子 ,而质粒经 DNaseI 处理后 ,则无此 应答; Ounouna 等[37 ]报道了海豚链球菌 ( Streptococcus iniae) 基因组 DNA 能增强斑点叉尾 NCC 的活力 ,而基因组 DNA 经 Dnase I 处理后 ,该作用消失; Kannelos 等[38 ] 报道 了鲫联合注射含有 CpG 基序的质粒 DNA 和蛋白亚单位 疫苗后 ,能增强鱼体抗体的应答能力; 此外 , Kanellos[39 ] 、 Kim[40 ]和 Heppell 等[41 ]也有类似的报道。 另外 ,核苷酸早就被认为是哺乳动物营养的重要组 成部分 , 可增强小鼠对金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus aureus) 和白色假丝酵母( Candida albicans) 的抵抗力。在鱼 类中 ,Burrells 等[42 ]报道了大西洋鲑、银大麻哈鱼和虹鳟 饲喂添加有外源核苷酸的饲料后 ,能增强对细菌、病毒、 立克次体感染的抵抗力。Sakai 等[43 ]也发现 ,饲料中添加 酵母来源的核苷酸 ,能增强鲤的非特异性免疫反应。 微生物代谢和发酵产物 研究表明 ,微生物的某些 代谢和发酵产物能作为鱼类免疫增强剂 ,如 FK2565 (庚酮2 y2D2谷氨酸2L2内消旋2二氨基庚二基2DC2 丙氨酸) 是与乳 酰四肽(FK2156) 相关的一种多肽 ,它是从橄榄灰链球菌 ( Streptomyces olivaceogriseus) 的培养液中分离获得的。Kitao 和 Yoshida 等[44 ]证实 ,虹鳟和青甘注射 FK2565 后能使吞 噬细胞活化 ,增强抗杀蛙气单胞菌的能力; 在虹鳟中 ,用 鲁氏耶尔森菌或杀蛙气单胞菌 O - 抗原制剂和 FK2565 联 合免疫后 ,能提高脾抗体形成细胞的数量和体液中抗体 的滴 度[45 ] 。EF203 是 微 生 物 利 用 鸡 蛋 的 发 酵 产 物 , 455 水 产 学 报 29 卷