聚焦层析(chromatolocusing) 该法是在等电点聚焦方法基础上发展起来的，其分离纯化蛋白质的依 据是等电点的差异和离子交换行为。蛋白质按其等电点在H梯度环境中进 行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成（由多缓冲剂和多缓冲交换剂形 成)是聚焦效应的先决条件，如果一种蛋白质加到已形成H梯度的层析柱上 时，由于洗脱液的连续流动，蛋白质将迅速地迁移到与它等电点相同的H 处。从此位置开始，该蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在 等电点H时被洗出。在聚焦层析过程中，一种样品分次加入时，只要先加 入者尚未洗出，并且有一定的时间进行聚焦，剩余样品还可以加到柱上， 其聚焦过程都能顺利完成。 流速10111101000CC3ag口口口 11111110100000000000□口□□ 1赠咖◆ 加0>移动速率 蛋白质1(p-7) 蛋白质2(pl-8) 田□日 田口日 TT个T7 TN7297Y pH梯度溶液的形成示意图 层析时的聚焦效应示意图聚焦层析（Chromatofocusing） 该法是在等电点聚焦方法基础上发展起来的，其分离纯化蛋白质的依 据是等电点的差异和离子交换行为。蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进 行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成(由多缓冲剂和多缓冲交换剂形 成)是聚焦效应的先决条件，如果一种蛋白质加到已形成pH梯度的层析柱上 时，由于洗脱液的连续流动，蛋白质将迅速地迁移到与它等电点相同的pH 处。从此位置开始，该蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在 等电点pH时被洗出。在聚焦层析过程中，一种样品分次加入时，只要先加 入者尚未洗出，并且有一定的时间进行聚焦，剩余样品还可以加到柱上， 其聚焦过程都能顺利完成。 pH梯度溶液的形成示意图 层析时的聚焦效应示意图 蛋白质1（pI=7） 蛋白质2（pI=8） 流速 移动速率