脲。(文献值:总巯基数=8,可反应巯基数=2) 巯基数= A412×0.88×86000 A280×13600 兔肌肌酸激酶(CK)的分子量=86000,C为酶浓度,C=A280/0.88/86000(mol/L)。 三、试剂 1.KCl0.0lmoL200ml(0.15gKCl溶于200mlH2O 2NH4OH1.7 mmol/L1000ml(取0.12ml浓氨水,加1000mlH2O) 3.柠檬酸铵0.05 mol/L pH9.0100mnl(称12.15g溶于1000mlHO 4. Tris-HCl0.1mol/LpH8.01000ml(参见蔗糖酶实验) 5.NH4Cl研细10 6.NH4OH5moL100ml(公用) 7.MgSO420mo/LpH8.520ml(公用) 8.MgAC20.07mo/Lp9.0100ml(公用) 9.NaOH:0.20.51.02.05.0(mol/L)(公用) 10. HAC 0.2mol/L 95% CH3CH2OH乙醇 12.粗盐 酶的纯化记录表 实验步骤体积蛋白质浓度总蛋白 比活力 总活力纯化倍数回收率 (ml)(mg/ml) (mg) (umol/(mg. min)(umol/min) 参考文献 1. Kenyon G L, Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. BioL., 1993, 54: 367 2. Seraydrarian M W. and Abbot b C. J Mol Cell Cardiol. 1976.8: 741 3. Nada L, Kuby S, Lardy H. Methods in Enzymol., 1954, 2: 605 4.姚启智,邹承鲁,生物化学与生物物理进展,1981,3:52。 263263 脲。(文献值：总巯基数= 8 ，可反应巯基数= 2 ) 兔肌肌酸激酶(CK)的分子量= 86000 ，C 为酶浓度，C= A280／0.88／86000 (mol/L)。 三、试剂 1. KCl 0.01mol/L 200ml (0.15g KCl 溶于 200ml H2O) 2. NH4OH 1.7mmol/L 1000ml (取 0.12ml 浓氨水，加 1000ml H2O) 3. 柠檬酸铵 0.05mol/L pH9.0 1000ml (称 12.15g 溶于 1000ml H2O) 4. Tris-HCl 0.1mol/L pH8.0 1000ml (参见蔗糖酶实验) 5. NH4Cl 研细 10g 6. NH4OH 5mol/L 100ml (公用) 7. MgSO4 2.0mol/L pH8.5 20ml (公用) 8. MgAC2 0.07mol/L pH9.0 100ml (公用) 9. NaOH ： 0.2 0.5 1.0 2.0 5.0 ( mol/L ) (公用) 10. HAC 0.2mol/L 11. 95% CH3CH2OH 乙醇 12. 粗盐 酶的纯化记录表： 实验步骤 体积 (ml) 蛋白质浓度 (mg/ml) 总蛋白 (mg) 比活力 (mol/(mg.min)) 总活力 (mol/min) 纯化倍数 回收率 1.0 100 参 考 文 献 1.Kenyon G L.,Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 1993, 54: 367. 2. Seraydrarian M W.and Abbot B C. J.Mol.Cell.Cardiol., 1976, 8: 741. 3. Nada L. , Kuby S. , Lardy H. Methods in Enzymol., 1954, 2: 605. 4. 姚启智, 邹承鲁, 生物化学与生物物理进展, 1981, 3: 52。 13600 0.88 86000 280 412 412    = = A A C A 巯基数 