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实验四种子中可溶性蛋白质含量的测定 一一考马斯亮蓝法 一、原理 考马斯亮蓝G250(Coomassie Bril训liant Blue G-250)是一种染料,在游离状态下呈棕红 色。1976年,M.M.Bradford发现考马斯亮蓝G-250与蛋白质后变为蓝色(青色),它的 光吸收峰从从465nm改变到595nm。蛋白质含量在0~1000g范围内,蛋白质-色素结合 物在595m下的吸光度质与蛋白质含量成正比,故可用比色法测定。种子蛋白质的考马 斯亮蓝G-250法,具有简便快捷(反应约在2mn左右达到平衡),灵敏度高,稳定性好(在 室温1h内稳定)的特点,是一种较常用方法。 二、目的要求 1掌握考马斯亮蓝法测定种子中可溶性蛋白质含量的原理和方法。 2比较不同小麦品种的种子蛋白质含量。 三、仪器设备 (1)分析天平 (2)离心机 (3)721型分光光度计 (4)离心管2mL×6 (5)具塞试管10mL×8 (6)吸管 0.1mLX1,1ml×2,5mL×1 (7)研体 (8)漏斗 (9)容量瓶10mL或20mL、25mL 四、试剂 (1)标准蛋白质溶液(100gmL):准确称取10mg牛血清白蛋白,用蒸馏水 定溶至100mL。 12
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