(2)考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250,溶于50mL95%乙醇 后，加入100mL85%(v~)磷酸溶液，最后蒸馏水定容至1000mL (3)50mmol/L酵酸缓冲液(pH7.0):取0.05mol/LNaH,P0439mL,与0.05molL Na.HPO461mL混合即可。（考马斯亮蓝溶液用之前要过滤） 五、材料 ()不同生理状态的小麦种子（未成熟的：受冻的：发过芽的） (2)不同生理状态的玉米种子（未成熟的：受冻的：发过芽的） 六、方法和步骤 1标准曲线的制作 取6支10mL具塞刻度试管，编号后，按下表加入试剂。 试管号 1 2 3 4 5 6 蛋白质含量(g 0 20 40 60 80 100 标准蛋白(mL) 0 0.2 04 0.6 08 1.0 pH7.0磷酸缓冲液(mL)1.00.8 0.6 0.4 0.2 0 G-250试剂(mL) 3 3 3 3 3 3 OD95值 盖上塞子，摇匀，放置2~3min后在595m下测定0D值（比色应在1h内完成》 以牛血清蛋白含量(g)为横坐标，以吸光度(OD值)为纵坐标，绘制标准曲线。 2样品中蛋白质含量的测定 (1)每个材料取10粒种子磨碎后，准确称取磨碎的样品03g~0.5g,放入研钵中， 加入10mLpH7.0磷酸缓冲液，充分匀浆后，转入10mL容量瓶，再用pH7.0硫酸缓冲 液反复冲洗研钵2~3次，将洗液合并于25mL容量瓶中，混匀、定溶至刻度。取2~3mL 匀浆于离心管中，5000×g离心10min,上清液即为蛋白质提取液。 (2)另取1支10mL具塞试管，准确加入1.0mL蛋白质提取液后，加入3mL考马 斯亮蓝G-250试剂，充分混匀后，放置2~3mi后，以标准曲线的1号试管溶液做参比， 在595nm波长下比色，记录吸光度。 13