件和方法,又可分为平板培养、看护培养、微室悬滴培养、条件培养、悬浮培养等。 组织培养所需温度一般是25~27℃,但组织不同,所需温度也有差异。例如,培养喜 温植物的茎尖,温度可以提高到30℃,有些植物(如大蒜)在恒温条件下会进入休眠,就 有必要进行低温处理来破除休眠。花与果实培养最好有昼夜温差,如昼温23~25℃,夜温 5~17℃。要根据不同材料、不同目的等确定具体条件 组织培养时的光照要求,因组织不同而异。茎尖、叶片培养要光照,以便进行光合作用 花果培养要避免直射光,以散射光和暗中培养较宜,根的组织培养通常在暗处进行。 (四)脱分化与再分化 组织培养中外植体经诱导可进行细胞分裂产生愈伤组织,这种原已分化的细胞形成失去 原有分化状态的、结构均一的愈伤组织或细胞团的过程,称脱分化( dedifferentiation)。愈 伤组织细胞经继代培养后,还可产生分化现象,这种由脱分化状态的细胞再度分化形成不同 类型有组织结构的细胞、组织、器官乃至再生成完整植株的过程,称为再分化 ( redifferentiation)。 植物体一分离外植体一分化→愈伤组织一分化组织、器官、植株 细胞无性系的形态发生,主要方式有:①不定芽方式,其过程是:外植体→愈伤组织→ 形成分生细胞→>形成器官原基→器官发生。②胚状体方式,指由培养细胞诱导分化出具胚 芽、胚根、胚轴的胚状结构(胚状体),进而长成完整植株。细胞经脱分化以后,发生持续 的细胞分裂增殖,并顺次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期,把由愈 伤组织不经有性过程而直接产生类似胚的这一结构,称为胚状体( embryoid),又称体细胞 胚( somatic embryo)或不定胚( adventitious embryo)。 (五)培养基 培养基一般由无机营养物、碳源、维生素、生长物质和有机附加物等几类物质组成 无机营养物中大量元素除C,O,H外,通常N用硝态氮或铵态氮,P常用磷酸盐,S 用硫酸盐,还有K,Ca,Na,Mg等。微量元素包括Mn,Zn,Cu,B,Mo和Fe等 碳源一般用蔗糖,浓度2%~4%。蔗糖除作培养基的碳源外,还有维持滲透势的作用 维生素中硫胺素是必需的,而烟酸、维生素B6(吡哆胺)和肌醇对生长起促进作用。 生长物质常用2,4-D和NAA等生长素类,因其不易分解,加热灭菌时比较稳定。IAA 有相同效果,但易被分解。此外,还加激动素、玉米素或6-苄基腺嘌呤等细胞分裂素类。 有机附加物是指氨基酸(如甘氨酸)、水解酪蛋白、酵母汁、椰子乳等,可促进分化 但如果基本培养基的配方适当,则大多数组织是不需要的。 现有培养基种类很多,这里介绍比较普遍使用的MS( Murashige- Skoog)培养基和中国 科学院植物研究所设计、适用于禾谷类花药和花粉培养的N6培养基,成分见表7-2。 (六)组织培养的应用 ①培肓作物新品种花药培养是单倍体育种的成功方法,我国已诱导出小麦、烟草、玉 米、杨树等的花粉植株;通过组织培养可人为诱发基因突变:还可克服杂交不亲和性。 ②快速无性繁殖植物植物组织培养中利用“芽生芽”的方式可进行苗木的快速繁殖 快繁技术简单易行,繁殖速度快,可解决某些难以用种子繁殖的植物的繁殖问题,且可节省 种株。某些花卉已达到工厂化生产、商品化出售的程度 ③获得无病毒植株利用茎尖(生长点)培养获得无病毒植株(vius- free plants), 在果树、马铃薯、甘薯等方面得到应用。脱毒植株一般具有长期不发病,生长发育好,果实 增大,产量大为提高,丰产年限长,品质大为改善等优点,是解决退化问题的有效途径 ④保存和运输种质资源试管苗便于运输和防止种苗带菌传播,利于种质交流,试管苗 可用于保存某些难以用种子保存的种质资源,节省人力、物力和时间。件和方法，又可分为平板培养、看护培养、微室悬滴培养、条件培养、悬浮培养等。 组织培养所需温度一般是 25～27℃，但组织不同，所需温度也有差异。例如，培养喜 温植物的茎尖，温度可以提高到 30℃，有些植物（如大蒜）在恒温条件下会进入休眠，就 有必要进行低温处理来破除休眠。花与果实培养最好有昼夜温差，如昼温 23～25℃，夜温 15～17℃。要根据不同材料、不同目的等确定具体条件。 组织培养时的光照要求，因组织不同而异。茎尖、叶片培养要光照，以便进行光合作用， 花果培养要避免直射光，以散射光和暗中培养较宜，根的组织培养通常在暗处进行。 （四）脱分化与再分化 组织培养中外植体经诱导可进行细胞分裂产生愈伤组织，这种原已分化的细胞形成失去 原有分化状态的、结构均一的愈伤组织或细胞团的过程，称脱分化（dedifferentiation）。愈 伤组织细胞经继代培养后，还可产生分化现象，这种由脱分化状态的细胞再度分化形成不同 类型有组 织 结构的细 胞 、组织、 器 官乃至再 生 成完整植 株 的过程， 称 为再分化 （redifferentiation）。 植物体 ⎯⎯→⎯ 外植体 愈伤组织 组织、器官、植株 分离 ⎯脱分化 ⎯⎯→ ⎯再分化 ⎯⎯→ 细胞无性系的形态发生，主要方式有：①不定芽方式，其过程是：外植体→愈伤组织→ 形成分生细胞→形成器官原基→器官发生。②胚状体方式，指由培养细胞诱导分化出具胚 芽、胚根、胚轴的胚状结构（胚状体），进而长成完整植株。细胞经脱分化以后，发生持续 的细胞分裂增殖，并顺次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，把由愈 伤组织不经有性过程而直接产生类似胚的这一结构，称为胚状体（embryoid），又称体细胞 胚（somatic embryo）或不定胚（adventitious embryo）。 （五）培养基 培养基一般由无机营养物、碳源、维生素、生长物质和有机附加物等几类物质组成。 无机营养物中大量元素除 C，O，H 外，通常 N 用硝态氮或铵态氮，P 常用磷酸盐，S 用硫酸盐，还有 K，Ca，Na，Mg 等。微量元素包括 Mn，Zn，Cu，B，Mo 和 Fe 等。 碳源一般用蔗糖，浓度 2%～4％。蔗糖除作培养基的碳源外，还有维持渗透势的作用。 维生素中硫胺素是必需的，而烟酸、维生素B6（吡哆胺）和肌醇对生长起促进作用。 生长物质常用 2,4-D 和 NAA 等生长素类，因其不易分解，加热灭菌时比较稳定。IAA 有相同效果，但易被分解。此外，还加激动素、玉米素或 6-苄基腺嘌呤等细胞分裂素类。 有机附加物是指氨基酸（如甘氨酸）、水解酪蛋白、酵母汁、椰子乳等，可促进分化， 但如果基本培养基的配方适当，则大多数组织是不需要的。 现有培养基种类很多，这里介绍比较普遍使用的MS（Murashige-Skoog）培养基和中国 科学院植物研究所设计、适用于禾谷类花药和花粉培养的N6培养基，成分见表 7-2。 (六)组织培养的应用 ①培育作物新品种 花药培养是单倍体育种的成功方法，我国已诱导出小麦、烟草、玉 米、杨树等的花粉植株；通过组织培养可人为诱发基因突变；还可克服杂交不亲和性。 ②快速无性繁殖植物 植物组织培养中利用“芽生芽” 的方式可进行苗木的快速繁殖。 快繁技术简单易行，繁殖速度快，可解决某些难以用种子繁殖的植物的繁殖问题，且可节省 种株。某些花卉已达到工厂化生产、商品化出售的程度。 ③获得无病毒植株 利用茎尖（生长点）培养获得无病毒植株（virus-free plants），已 在果树、马铃薯、甘薯等方面得到应用。脱毒植株一般具有长期不发病，生长发育好，果实 增大，产量大为提高，丰产年限长，品质大为改善等优点，是解决退化问题的有效途径。 ④保存和运输种质资源 试管苗便于运输和防止种苗带菌传播，利于种质交流，试管苗 可用于保存某些难以用种子保存的种质资源，节省人力、物力和时间