基因诊断技术 陆雪芹13307090080 、应用原理: 1.概述 基因诊断亦称DNA探针诊断,是通过探测 某些特异基因来诊断疾病的方法。基因诊断是 根据DNA分子杂交的原理,探测基因的存在 类型和基因的缺陷,从而达到诊断疾病的目 的。 基因诊断的方法概述 传统诊断方法是通过表现型来推测基因型不同,基因诊断是从基因着手来推断表现 型,即绕过基因产物,通过直接探查基因进行诊断,不受细胞类型和发病年龄的限制,可 用于一切遗传病的诊断。 基因诊断的常用方法 核酸分子杂交技术 聚合酶链式反应(PCR单链构象多态性检测 DNA序列测定 限制性酶谱分析 (SSCPY ①.核酸分子杂交技术:指有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链 的过程,以检测样本中是否存在与探针序列互补的同源核酸序列 限制性内切酶分析法此方法是利用限制性内切酶∞ngmx 和特异性DNA探针来检测是否存在基因变异。当待 测DNA序列中发生突变时会导致某些限制性内切∞mx 酶位点的改变,借此可作出分析诊断 DNA限制性片断长度多态性分析。在人类基因组中,∞∞MM∞ 平均约200对碱基可发生一对变异。秒DNA多态 性发生在限制性内切酶识别位点上,酶解该DNA片 段就会产生长度不同的片断,称为限制性片段长度 多态性(RFLP)。 PCR原理示意图 ②.聚合酶链反应(PCR) DNA双模板 PCR技术采用特异的引物,能特异地扩增出目 基序列和正常基因仍然相同根据待测基因两端的mw 的DNA片段。由于在基因顺序中突变区两侧的碱 DNA顺序设计出一对引物,经PCR反应将目的基 三步 因片断扩增出来,即可进一步分析判断致病基因的三,延果减T 存在与否,并了解其变异的形式。 工二 ③.单链构象多态性分析:相同长度的单链DNA基因碱基序列不同,甚至单个碱基不同,都 可能形成不同的空间构象,从而在电泳时泳动速率不同。PCR产物变性后,经聚丙烯酰胺 凝胶电泳,正常基因和变异基因的迁移位置不同,借此可分析确定致病基因的存在。基因诊断技术 陆雪芹 13307090080 一、应用原理： 1. 概述： 基因诊断亦称 DNA 探针诊断，是通过探测 某些特异基因来诊断疾病的方法。基因诊断是 根据 DNA 分子杂交的原理，探测基因的存在、 类型和基因的缺陷，从而达到诊断疾病的目 的。 2. 基因诊断的方法概述： 传统诊断方法是通过表现型来推测基因型不同，基因诊断是从基因着手来推断表现 型，即绕过基因产物，通过直接探查基因进行诊断，不受细胞类型和发病年龄的限制，可 用于一切遗传病的诊断。 ①. 核酸分子杂交技术：指有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链 的过程，以检测样本中是否存在与探针序列互补的同源核酸序列。 i. 限制性内切酶分析法 ii. 。此方法是利用限制性内切酶 和特异性DNA探针来检测是否存在基因变异。当待 测DNA序列中发生突变时会导致某些限制性内切 酶位点的改变，借此可作出分析诊断。 DNA限制性片断长度多态性分析 段就会产生长度不同的片断，称为限制性片段长度 多态性(RFLP)。 。在人类基因组中， 平均约 200 对碱基可发生一对变异。不少 DNA多态 性发生在限制性内切酶识别位点上，酶解该DNA片 ②. 聚合酶链反应(PCR) PCR 技术采用特异的引物，能特异地扩增出目 的 DNA 片段。由于在基因顺序中突变区两侧的碱 基序列和正常基因仍然相同。根据待测基因两端的 DNA 顺序设计出一对引物，经 PCR 反应将目的基 因片断扩增出来，即可进一步分析判断致病基因的 存在与否，并了解其变异的形式。 ③. 单链构象多态性分析：相同长度的单链 DNA 基因碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都 可能形成不同的空间构象，从而在电泳时泳动速率不同。PCR 产物变性后，经聚丙烯酰胺 凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。 基因诊断的常用方法 核酸分子杂交技术 聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 单链构象多态性检测 （ＳＳＣＰ） ＤＮＡ序列测定 限制性酶谱分析