围的水化膜(水化层)以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋 白质胶体系统稳定的主要因素。当这些稳定因素被破坏时,蛋白质会产生沉淀。高浓度 中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷,从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出, 即盐析。但这种作用并不引起蛋白质的变性。这个性质可用于蛋白质的分离。 蛋白质受到某些物理或化学因素作用时,引起生物活性的丧失,溶解度的降低以及 其它性质的改变,这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质 高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体,但未涉及共价键的断裂。有些变性 是可逆的,有些变性是不可逆的。当变性条件不剧烈时,变性是可逆的,除去变性因素 后,变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象,恢复或部分恢复其原有的生物活性,这 种现象称为蛋白质的复性 (六)测定蛋白质分子量的方法 凝胶过滤法 凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由于不同排阻范围的葡 聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成 线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准,进行凝胶层析,以每种蛋白质的 洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件 下进行凝胶层析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应 的分子量 2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和 所带电荷的多少。SDS(十二烷基磺酸钠)是一种去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚 基。当蛋白质样品中加入SDS后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的 强负电荷,并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状,从而消除了蛋白质分子之间原有的 带电荷量和分子形状的差异。这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小,蛋白质分 子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数 和其相对迁移率作图,得到标准曲线,根据所测样品的相对迁移率,从标准曲线上便可 查出其分子质量 3.沉降法(超速离心法) 沉降系数(S)是指单位离心场强度溶质的沉降速度。S也常用于近似地描述生物 大分子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时,由于比重关系,蛋白质分子趋于下沉 沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比,应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行 为,可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系数,将S带入公式,即可 计算出蛋白质的分子质量 RTS4 围的水化膜（水化层）以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋 白质胶体系统稳定的主要因素。当这些稳定因素被破坏时，蛋白质会产生沉淀。高浓度 中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷，从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出， 即盐析。但这种作用并不引起蛋白质的变性。这个性质可用于蛋白质的分离。 蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及 其它性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质 高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。有些变性 是可逆的，有些变性是不可逆的。当变性条件不剧烈时，变性是可逆的，除去变性因素 后，变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象，恢复或部分恢复其原有的生物活性，这 种现象称为蛋白质的复性。 （六）测定蛋白质分子量的方法 1．凝胶过滤法 凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由于不同排阻范围的葡 聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围，在此范围内，分子量的对数和洗脱体积之间成 线性关系。因此，用几种已知分子量的蛋白质为标准，进行凝胶层析，以每种蛋白质的 洗脱体积对它们的分子量的对数作图，绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件 下进行凝胶层析，根据其所用的洗脱体积，从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应 的分子量。 2．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和 所带电荷的多少。SDS（十二烷基磺酸钠）是一种去污剂，可使蛋白质变性并解离成亚 基。当蛋白质样品中加入 SDS 后，SDS 与蛋白质分子结合，使蛋白质分子带上大量的 强负电荷，并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状，从而消除了蛋白质分子之间原有的 带电荷量和分子形状的差异。这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小，蛋白质分 子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数 和其相对迁移率作图，得到标准曲线，根据所测样品的相对迁移率，从标准曲线上便可 查出其分子质量。 3．沉降法（超速离心法） 沉降系数（S）是指单位离心场强度溶质的沉降速度。S 也常用于近似地描述生物 大分子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉， 沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比，应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行 为，可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系数，将 S 带入公式，即可 计算出蛋白质的分子质量。 D(1 V ) RTS M - =