实验五细胞组分的分离和鉴定 一、实验目的 1、理解以细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分的方法。 2、了解细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分的原理及过程。 二、实验用品 (一)材料和标本：小白鼠、冰块。 (二)器材和仪器：玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通 天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10加l 量筒、25l烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、 牙签 (三)试剂：0.25m01/L蔗糖溶液、1%甲苯胺兰染液、0.02%詹纳斯 绿B染液、0.9%NaC1溶液、甲基绿-派罗宁混合染液、 三、实验内容与方法 (一)原理 细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也 不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分 离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮个质中用差 速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种 方法己成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。 匀浆(lomogenization):低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗 匀浆介质进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 分级分离(Fractionation):由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使 较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而 使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密 度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的 第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。 分析：分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能 鉴定。 (二)操作步骤 1、细胞核的分离提取 (1)用颈椎脱白的方法处死取饥饿24小时的小白鼠后，迅速剖开腹部 13 13 实验五 细胞组分的分离和鉴定 一、实验目的 1、理解以细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分的方法。 2、了解细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分的原理及过程。 二、实验用品 （一）材料和标本：小白鼠、冰块。 （二）器材和仪器：玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通 天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml 量筒、25ml 烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、螬盘、平皿、 牙签。 （三）试剂：0.25mol／L 蔗糖溶液、1％甲苯胺兰染液、0.02％詹纳斯 绿 B 染液、0.9％NaCl 溶液、甲基绿-派罗宁混合染液、 三、实验内容与方法 （一）原理 细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也 不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分 离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差 速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种 方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。 匀浆(Homogenization)：低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗 匀浆介质进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 分级分离(Fractionation)：由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使 较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而 使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密 度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的 第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。 分析：分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能 鉴定。 （二）操作步骤 1、细胞核的分离提取 （1）用颈椎脱臼的方法处死取饥饿 24 小时的小白鼠后，迅速剖开腹部