在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响 由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小45个数量 级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此,样品进入色 谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测 器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效 降低。为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果, Agilent110OLC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。 毛细管线分类:0.17m内径绿色;0.12m内径一红 色。 PEEK管线:内径 0.13mm;0.18m;0.25mm;0.5mm。 毛细管线优点:柔韧性好 * Agilent公司同时备有1/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习 惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些。 4、流动相使用前为什么要脱气? 流动相使用前必须进行脱气处理,以除去其中溶解的气体(如 02),以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力 降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音,造成灵敏度下降,甚至无 法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化,柱中固定相发 生降解而改变柱的分离性能。若用FLD,可能会造成荧光猝灭 常用的脱气方法比较: 氦气脱气法:利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效 果较好,但成本高。 加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染。11 在使用 HPLC 时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响， 由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小 4~5 个数量 级，液体流动相的流速也比气相慢 1-2 个数量级。因此，样品进入色 谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测 器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效 降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent 1100LC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。 毛细管线分类：0.17mm 内径 ------绿色 ;0.12mm 内径-------红 色。 PEEK 管线：内径 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。 毛细管线优点: 柔韧性好. ***Agilent 公司同时备有 1/16in 的粗外径毛细管线,适用于不同习 惯的用户 ,优点是刚性好,但柔韧性差一些。 4、流动相使用前为什么要脱气？ 流动相使用前必须进行脱气处理 ，以除去其中溶解的气体（如 O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力 降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无 法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发 生降解而改变柱的分离性能。若用 FLD，可能会造成荧光猝灭。 常用的脱气方法比较： 氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效 果较好，但成本高。 加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染