DNA后再用标记的β珠蛋白基因为探针作 Southern杂交时,就会出现 不同的DNA条带。限制性内切酶MⅡ切割的序列是 CCTNAGG(其 中N是任何一种核苷酸),切割正常DNA产生1.kbβ珠蛋白的DNA 片段;若切割患者DNA时,由于A→T破坏了Mt的位点,便形成 1.3kbβ珠蛋白的DNA片段(图11-5) 2.血友病A的基因诊断甲型血友病是最常见的由遗传性凝血 功能障碍所致的出血性疾病,表现为ⅹ连锁隐性遗传。该病的根源是 凝血因子Ⅷ( FactorⅧ,FⅧ)基因的缺陷,其中大范围的基因重排(如 缺失、插入和重复)只占5%,主要突变类型为碱基取代或少数碱基 的缺失和插入,这些突变产物可能是不完整的、无活性的或不稳定的 因子Ⅷ肽链,导致临床症状轻重不一。采用基因诊断方法可以检出携 带者和进行早期产前检查,降低该病的发生率。由于FⅧ基因组织结 构庞大,分子病理学改变复杂,对该基因的产前诊断可以通过RFLP 连锁分析进行。在因子FⅧ基因内侧及旁侧有多组RFLP位点可供产 前诊断。目前多采用PCR技术与RFLP相结合的方法。首先用PCR 技术将包含突变DNA的片段扩增出来,然后用识别该位点的限制酶 来酶解,电泳后直接检测多态性位点的状态。 (二)基因诊断在肿瘤中的应用 人类恶性肿瘤的演变过程复杂,是多步骤、多基因参与的分子事 件,涉及多个癌基因的激活和抗癌基因(或称肿瘤抑制基因)的丢失。 现以人大肠癌为例说明这一演变过程,进而提供基因诊断的依据。正 常肠上皮细胞经腺瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级最终发展成为恶性肿瘤一大肠癌, 并依其解剖部位分为结肠癌、直肠癌。在肠癌癌变的过程中存在抗癌 基因FAP( family adenomatous polyposis)基因、DCC基因、p53基因 的丢失,p53基因的突变、癌基因Kuas的点突变、C-mc的过量表达 等现象 1.ras基因突变的检测ms基因突变的检测可采用PCR-ASO方 法进行。已知rs基因突变的热点在12、13及61密码子,可人工合 成的位于待测点两侧的引物,分别扩增含12、13及61位点的基因片 段,然后将扩增产物结合在尼龙膜上分别与πs癌基因密码子12、13DNA 后再用标记的珠蛋白基因为探针作 Southern 杂交时，就会出现 不同的 DNA 条带。限制性内切酶 MstⅡ切割的序列是 CCTNAGG（其 中 N 是任何一种核苷酸），切割正常 DNA 产生 1.1kb 珠蛋白的 DNA 片段；若切割患者 DNA 时，由于 A→T 破坏了 MstⅡ的位点，便形成 1.3kb 珠蛋白的 DNA 片段（图 11-5）。 2．血友病 A 的基因诊断 甲型血友病是最常见的由遗传性凝血 功能障碍所致的出血性疾病，表现为 X 连锁隐性遗传。该病的根源是 凝血因子Ⅷ（FactorⅧ，FⅧ）基因的缺陷，其中大范围的基因重排（如 缺失、插入和重复）只占 5％，主要突变类型为碱基取代或少数碱基 的缺失和插入，这些突变产物可能是不完整的、无活性的或不稳定的 因子Ⅷ肽链，导致临床症状轻重不一。采用基因诊断方法可以检出携 带者和进行早期产前检查，降低该病的发生率。由于 FⅧ基因组织结 构庞大，分子病理学改变复杂，对该基因的产前诊断可以通过 RFLP 连锁分析进行。在因子 FⅧ基因内侧及旁侧有多组 RFLP 位点可供产 前诊断。目前多采用 PCR 技术与 RFLP 相结合的方法。首先用 PCR 技术将包含突变 DNA 的片段扩增出来，然后用识别该位点的限制酶 来酶解，电泳后直接检测多态性位点的状态。 （二）基因诊断在肿瘤中的应用 人类恶性肿瘤的演变过程复杂，是多步骤、多基因参与的分子事 件，涉及多个癌基因的激活和抗癌基因（或称肿瘤抑制基因）的丢失。 现以人大肠癌为例说明这一演变过程，进而提供基因诊断的依据。正 常肠上皮细胞经腺瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级最终发展成为恶性肿瘤—大肠癌， 并依其解剖部位分为结肠癌、直肠癌。在肠癌癌变的过程中存在抗癌 基因 FAP（family adenomatous polyposis）基因、DCC 基因、p53 基因 的丢失，p53 基因的突变、癌基因 K-ras 的点突变、C-myc 的过量表达 等现象。 1．ras 基因突变的检测 ras 基因突变的检测可采用 PCR-ASO 方 法进行。已知 ras 基因突变的热点在 12、13 及 61 密码子，可人工合 成的位于待测点两侧的引物，分别扩增含 12、13 及 61 位点的基因片 段，然后将扩增产物结合在尼龙膜上分别与 ras 癌基因密码子 12、13