系列序列差异的探针,以求准确判定等位基因类型(图18-3)。 图18-3ASO探针杂交原理示意图 应该说PCR-ASO方法本身并不复杂,但杂交过程耗时较多,不 利于快速出结果。另外每一个探针检测范围只有几十个碱基,跨度太 小,这些都是该方法的缺陷。 (3)PCR-SSCP:SSCP是单链构象多态性( single- strand conformation polymorphism,SscP)的缩写。其原理是当双链DNA变 性为两条单链后,各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象,因 而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发 生变化,甚至只有一个碱基变化,空间构象也有可能发生变化,电泳 条带也随之变化。也就是说在相同的条件下,当被检DNA电泳条带 与已知序列的对照DNA电泳条带不一致时,可以认为被检DNA的序 列与对照DNA不同(图18-4)。 图1844SSP原理示意图 该方法包括①PCR。即利用一对或数对特异性引物,将目标DNA 扩增;②变性。即将PCR产物在变性缓冲液中加热变性;③电泳。即 将已变性的PCR产物加载到中性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳,根据电 泳条带的位置判断DNA序列是否发生变化 分子诊断技术的应用 (一)基因诊断在遗传病中的应用 镰状细胞贫血的基因诊断镰状细胞贫血的基因诊断原理在 于它的血红蛋白中的β珠蛋白基因(β globin,β)发生了突变,其谷 氨酸残基(密码子GAG)变为缬氨酸(密码子GTG)。基于A→T的 变换,改变了限制性内切酶的位点,因此在酶解正常人DNA和患者一系列序列差异的探针，以求准确判定等位基因类型（图 18-3）。 图 18-3 ASO 探针杂交原理示意图 应该说 PCR-ASO 方法本身并不复杂，但杂交过程耗时较多，不 利于快速出结果。另外每一个探针检测范围只有几十个碱基，跨度太 小，这些都是该方法的缺陷。 （ 3 ） PCR-SSCP ： SSCP 是 单 链 构 象 多 态 性 (single-strand conformation polymorphism，SSCP)的缩写。其原理是当双链 DNA 变 性为两条单链后，各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象，因 而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果 DNA 序列发 生变化，甚至只有一个碱基变化，空间构象也有可能发生变化，电泳 条带也随之变化。也就是说在相同的条件下，当被检 DNA 电泳条带 与已知序列的对照 DNA 电泳条带不一致时，可以认为被检 DNA 的序 列与对照 DNA 不同（图 18-4）。 图 18-4 SSCP 原理示意图 该方法包括①PCR。即利用一对或数对特异性引物，将目标 DNA 扩增；②变性。即将 PCR 产物在变性缓冲液中加热变性；③电泳。即 将已变性的 PCR 产物加载到中性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，根据电 泳条带的位置判断 DNA 序列是否发生变化。 三、分子诊断技术的应用 （一）基因诊断在遗传病中的应用 1．镰状细胞贫血的基因诊断 镰状细胞贫血的基因诊断原理在 于它的血红蛋白中的珠蛋白基因（globin，6）发生了突变，其谷 氨酸残基（密码子 GAG）变为缬氨酸（密码子 GTG）。基于 A→T 的 变换，改变了限制性内切酶的位点，因此在酶解正常人 DNA 和患者