较和检测,得出所要的信息。 基因芯片可以进行微量化、大规模、并行化、高度自动化地处理 感兴趣的生物样品,精细地研究各种状态下分子结构变异,了解组织 细胞基因表达情况。即可以检测基因的多态性,也能检测基因突变, 特别适用于多个基因、多个位点的同时检测,大大节约了诊断时间 但目前基因芯片检测费用较高,还没有在临床上广泛使用。随着技术 的成熟和费用的降低,临床诊断的前景十分广阔。 5.其它常用的技术 (1) PCR-RFLP是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测 技术。由于DNA序列的差异,造成了内切酶位点的变化,或是新的 酶切位点的产生;或是原酶切位点的消失等,通过酶切后电泳图谱的 判断,达到确定检测结果。该方法包括①PCR。即利用一对或数对特 异性引物,将目标DNA扩增;②酶切。即利用某些限制性内切酶消 化PCR产物,如PCR产物中含有相应的酶切位点序列,DNA链则被 切开;③电泳。即利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的 PCR产物,根据电泳图谱判断结果。 如果某DNA序列已经全部确定,则可以通过计算机辅助设计特 异性PCR引物;扩增DNA片断和进行酶切位点分析,该方法简便易 行,精确度也很高。但是该方法也有一定的局限性,如果多态性位点 的DNA序列没有相应的内切酶,则该方法不适用 (2)PCR-ASO:ASO为等位基因特异性寡核苷酸(Ale- specific oligonucleotide,ASO)的简称。PCR-ASO是基于核酸杂交的一种方 法,它使用只有几十个核苷酸的探针,检测被检DNA中的同源序列。 由于探针比较短,当被检DNA序列与探针不完全互补,甚至只要有 一个碱基的差异,杂交分子就不能稳定形成,因此该方法的灵敏度非 常高,特异性也非常好。该方法包括①PCR。即利用一对或数对特异 性引物,将目标DNA扩增;②杂交。即利用标记的ASO探针与PCR 产物杂交,根据杂交信号进行HLA多态性判断。如果PCR产物中的 序列与探针序列完全配对,则出现典型的杂交信号,如果不完全配对, 杂交信号都将明显减弱甚至消失。通常进行ASO探针杂交时,选用较和检测，得出所要的信息。 基因芯片可以进行微量化、大规模、并行化、高度自动化地处理 感兴趣的生物样品，精细地研究各种状态下分子结构变异，了解组织 细胞基因表达情况。即可以检测基因的多态性，也能检测基因突变， 特别适用于多个基因、多个位点的同时检测，大大节约了诊断时间。 但目前基因芯片检测费用较高，还没有在临床上广泛使用。随着技术 的成熟和费用的降低，临床诊断的前景十分广阔。 5．其它常用的技术 （1）PCR-RFLP 是将聚合酶链反应与 RFLP 方法结合的一种检测 技术。由于 DNA 序列的差异，造成了内切酶位点的变化，或是新的 酶切位点的产生；或是原酶切位点的消失等，通过酶切后电泳图谱的 判断，达到确定检测结果。该方法包括①PCR。即利用一对或数对特 异性引物，将目标 DNA 扩增；②酶切。即利用某些限制性内切酶消 化 PCR 产物，如 PCR 产物中含有相应的酶切位点序列，DNA 链则被 切开；③电泳。即利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切后的 PCR 产物，根据电泳图谱判断结果。 如果某 DNA 序列已经全部确定，则可以通过计算机辅助设计特 异性 PCR 引物；扩增 DNA 片断和进行酶切位点分析，该方法简便易 行，精确度也很高。但是该方法也有一定的局限性，如果多态性位点 的 DNA 序列没有相应的内切酶，则该方法不适用。 （2）PCR-ASO：ASO 为等位基因特异性寡核苷酸（Allele-specific oligonucleotide，ASO）的简称。PCR-ASO 是基于核酸杂交的一种方 法，它使用只有几十个核苷酸的探针，检测被检 DNA 中的同源序列。 由于探针比较短，当被检 DNA 序列与探针不完全互补，甚至只要有 一个碱基的差异，杂交分子就不能稳定形成，因此该方法的灵敏度非 常高，特异性也非常好。该方法包括①PCR。即利用一对或数对特异 性引物，将目标 DNA 扩增；②杂交。即利用标记的 ASO 探针与 PCR 产物杂交，根据杂交信号进行 HLA 多态性判断。如果 PCR 产物中的 序列与探针序列完全配对，则出现典型的杂交信号，如果不完全配对， 杂交信号都将明显减弱甚至消失。通常进行 ASO 探针杂交时，选用