根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交( Southern blot)、RNA 印迹杂交( Northern blot)、点杂交和原位杂交。其基本过程包括下列 几个步骤。 2.聚合酶链反应核酸杂交反应是一对一的反应,即膜上有 个被检测分子时,相应就有一个标记的探针分子与它杂交。所以整个 实验敏感性主要取决于标记探针的质量和杂交后的检测方法。在优化 的条件下,核酸杂交可检测到pg水平的靶分子,约相当于106个分子 但是,在许多临床情况下,无法得到这样的样品量。这时可以用聚合 酶链反应来扩增靶分子以特异性地増加靶分子量,达到提髙敏感性的 目的。 3.DNA测序测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能 关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解 法、自动测序,DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常 用 Sanger双脱氧链终止法。 Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧 链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA 模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本 原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板,合成出准确互补链,在合 成时,某种dNTP换成了dNTP(2′,3′-双脱氧核苷三磷酸),这 时,DNA聚合酶使dNTP渗入到寡核苷酸链的3′末端,导致无3′ OH的核苷酸无法继续与其它核苷酸连接而终止了DNA链的生长。 双脱氧核苷酸的种类不同,掺入的位置不同,就造成了在不同的位置 终止的长度不等的互补链。通过掺入的放射性核苷酸结合聚丙烯酰胺 凝胶电泳,即可读出模板DNA的互补链序列 4.基因芯片技术基因芯片技术是近年来发展十分迅速的大规 模、高通量分子检测技术。其基本原理是核酸杂交,其基本过程是将 许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针,有规律地排列固定于 支持物上,形成矩阵点。现在的技术可以做到在1cm2上排列成千上 万个“点”。样品 DNA/RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧 光标记分子,然后按碱基配对原理进行杂交,再通过荧光检测系统等 对芯片进行扫描,并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号做出比根据检测样品的不同又被分为 DNA 印迹杂交（Southern blot）、RNA 印迹杂交（Northern blot）、点杂交和原位杂交。其基本过程包括下列 几个步骤。 2．聚合酶链反应 核酸杂交反应是一对一的反应，即膜上有一 个被检测分子时，相应就有一个标记的探针分子与它杂交。所以整个 实验敏感性主要取决于标记探针的质量和杂交后的检测方法。在优化 的条件下，核酸杂交可检测到 pg 水平的靶分子，约相当于 106个分子。 但是，在许多临床情况下，无法得到这样的样品量。这时可以用聚合 酶链反应来扩增靶分子以特异性地增加靶分子量，达到提高敏感性的 目的。 3．DNA 测序 测定 DNA 的核苷酸序列是分析基因结构与功能 关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解 法、自动测序，DNA 测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常 用 Sanger 双脱氧链终止法。Sanger 法就是使用 DNA 聚合酶和双脱氧 链终止物测定 DNA 核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的 DNA 模板或经变性的双链 DNA 模板和一种恰当的 DNA 合成引物。其基本 原理是 DNA 聚合酶利用单链的 DNA 模板，合成出准确互补链，在合 成时，某种 dNTP 换成了 ddNTP（2′，3′-双脱氧核苷三磷酸），这 时，DNA 聚合酶使 ddNTP 渗入到寡核苷酸链的 3′末端，导致无 3′ -OH 的核苷酸无法继续与其它核苷酸连接而终止了 DNA 链的生长。 双脱氧核苷酸的种类不同，掺入的位置不同，就造成了在不同的位置 终止的长度不等的互补链。通过掺入的放射性核苷酸结合聚丙烯酰胺 凝胶电泳，即可读出模板 DNA 的互补链序列。 4．基因芯片技术 基因芯片技术是近年来发展十分迅速的大规 模、高通量分子检测技术。其基本原理是核酸杂交，其基本过程是将 许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于 支持物上，形成矩阵点。现在的技术可以做到在 1cm2 上排列成千上 万个“点”。样品 DNA/RNA 通过 PCR 扩增、体外转录等技术掺入荧 光标记分子，然后按碱基配对原理进行杂交，再通过荧光检测系统等 对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号做出比