到2倍,4倍,8倍……,即2的释释血清。 3.免疫双扩散 按照抗血清稀释倍数的顺序用微量取液器依次取一定量的稀释抗血清加在琼脂板上外 周的孔内(充满平),然后在中心的孔里加入抗原,加样完毕后把琼脂板放入湿润密闭的培 养皿中放置24-48小时即可观察到沉淀线 免疫血清效价的判断方法,就是能够观察到沉淀线的免疫血清的最大稀释倍数,称为免 疫血清的效价 实验(四)对流免疫电泳 对流免疫电泳( counter immunoelectrophoresis)通过外加电场以限制抗原、抗体的自由 扩散,提高抗原、抗体的局部浓度,加快两者的移动速度。由于血清抗原在碱性缓冲液中 (pH8.6)带负电荷,由负极向正极移动,血清抗体由于接近等电点,由正极向负极渗透(电 渗效应),比例合适时,二者相遇形成白色沉淀线。此法可定性或定量 实验目的:学习快速测定免疫效价的方法。 二.器材与试剂 1.电泳仪 2.平板电泳槽 3.pH86电板缓冲液(巴比妥缓冲液)离子强度0.05μ。取巴比妥(Mw18419)1.84g 巴比妥钠(Mw.20620)10.3g溶于蒸馏水,定溶至1升。这是电泳槽用液。制备琼脂溶液 时需要将上述缓冲稀释一倍,离子强度为0.025μ。 其它器材和试剂同实验三。 三.实验方法 1.铺制琼脂板 用离子强度μ=0.025的巴比妥缓冲液配制琼脂溶液20m,按双向免疫扩散法中描述的 方法铺制琼脂板,按图2打孔271 到 2 倍，4 倍，8 倍……，即 2 n 的释释血清。 3. 免疫双扩散 按照抗血清稀释倍数的顺序用微量取液器依次取一定量的稀释抗血清加在琼脂板上外 周的孔内（充满平），然后在中心的孔里加入抗原，加样完毕后把琼脂板放入湿润密闭的培 养皿中放置 24-48 小时即可观察到沉淀线。 免疫血清效价的判断方法，就是能够观察到沉淀线的免疫血清的最大稀释倍数，称为免 疫血清的效价。 实验(四) 对流免疫电泳 对流免疫电泳（counter immunoelectrophoresis）通过外加电场以限制抗原、抗体的自由 扩散，提高抗原、抗体的局部浓度，加快两者的移动速度。由于血清抗原在碱性缓冲液中 （pH8.6）带负电荷，由负极向正极移动，血清抗体由于接近等电点，由正极向负极渗透（电 渗效应），比例合适时，二者相遇形成白色沉淀线。此法可定性或定量。 一. 实验目的：学习快速测定免疫效价的方法。 二. 器材与试剂 1. 电泳仪 2. 平板电泳槽 3. pH 8.6 电板缓冲液（巴比妥缓冲液）离子强度 0.05。取巴比妥（MW184.19）1.84g, 巴比妥钠（M.W.206.20）10.3g 溶于蒸馏水，定溶至 1 升。这是电泳槽用液。制备琼脂溶液 时需要将上述缓冲稀释一倍，离子强度为 0.025。 其它器材和试剂同实验三。 三. 实验方法 1. 铺制琼脂板 用离子强度 =0.025 的巴比妥缓冲液配制琼脂溶液 20ml，按双向免疫扩散法中描述的 方法铺制琼脂板，按图 2 打孔